2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
   探討低溫對(duì)心肌細(xì)胞凋亡率、乳酸脫氫酶活性變化的影響,以及促凋亡蛋白Bim和信號(hào)通路PI3K/AKT在低溫處理后心肌細(xì)胞中的表達(dá)和作用。
   方法:
   1.取健康乳鼠(出生1-3d)心臟,利用0.08%胰酶和1.00%Ⅱ型膠原酶依次消化心肌組織,加入0.1%mM5-Brdu抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),混懸液經(jīng)差速貼壁2h后,以1×106/ml的細(xì)胞密度接種于35mm的培養(yǎng)皿中,待心肌細(xì)胞生長(zhǎng)接近匯合狀

2、念及呈現(xiàn)同步搏動(dòng)時(shí)開始實(shí)驗(yàn)。
   2.建立心肌細(xì)胞凋亡模型,模擬低溫環(huán)境,將心肌細(xì)胞放入4℃恒溫箱處理1h,然后將心肌細(xì)胞在37℃含有5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育0h,4h,8h,12h,16h,24h.以各時(shí)間點(diǎn)正常培養(yǎng)心肌細(xì)胞為對(duì)照組。選取Bim蛋白開始表達(dá)的時(shí)間點(diǎn),加入PI3K/AKT阻斷劑LY294002后2小時(shí)再進(jìn)行低溫處理,再次檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。
   3.分別用流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,MTS檢測(cè)細(xì)胞存活率。

3、Westernblotting檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)Bim,PI3K,p-PI3K表達(dá)。
   結(jié)果:
   1.低溫處理1h后,心肌細(xì)胞在0h的凋亡率及乳酸脫氫酶活性均較正常對(duì)照組增加(分別為20.01±1.43 vs6.79±1.50,P<0.05;43.30±2.50 vs
   18.13±1.57,p<0.05)。隨著復(fù)溫后心肌細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞凋亡率增加,在24h組達(dá)到最高,這與乳酸脫氫酶活性水平變化一致

4、。
   2.Bim蛋白在低溫處理1h后即開始升高,在繼續(xù)培養(yǎng)的各時(shí)間點(diǎn),均高于對(duì)照組(P<0.05);這與細(xì)胞凋亡率變化相一致,而各時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組間Bim表達(dá)無(wú)明顯變化。
   3.加入PI3K/AKT阻斷劑LY294002(終濃度25umol/L)行低溫處理1小時(shí)后,心肌細(xì)胞凋亡率較單純低溫處理組組明顯升高(P<0.01),Bim在低溫+阻斷劑組的表達(dá)較低溫組增高(P<0.05),p-PI3K在低溫組表達(dá)較阻斷劑組和正

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