小鼠肝泡型包蟲(chóng)病中miRNAs表達(dá)譜的初步篩選及miR-106b-25基因簇的表達(dá)和意義.pdf

1、目的：初步篩選泡球蚴感染宿主肝臟中miRNAs的表達(dá)譜并探討miR-106b-25基因簇在肝泡型包蟲(chóng)病中的表達(dá)及意義。
　　方法：取雌性Balb/c小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組和正常組，實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔注射泡球蚴，對(duì)照組腹腔注射等容量生理鹽水，正常組不作處理并在接種當(dāng)日采集肝臟標(biāo)本。接種后1月、3月和6月分別各取5只造模成功的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠肝臟標(biāo)本，提取RNA；將感染3月小鼠肝臟的小分子RNA標(biāo)記后與miRNAs微陣列芯片雜交。掃

2、描雜交后的芯片并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得到肝泡型包蟲(chóng)病的miRNAs表達(dá)譜。熒光定量 RT-PCR法檢測(cè)在1月、3月、6月三個(gè)時(shí)間點(diǎn)泡球蚴病小鼠肝臟中miR-93、miR-106b、miR-494、miR-152、miR-191和miR-199a的相對(duì)表達(dá)，預(yù)測(cè)miR-93和miR-106b的靶基因并初步分析。
　　結(jié)果：基因芯片結(jié)果顯示，相比對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟組織中有46個(gè)差異表達(dá)的miRNAs，29個(gè)上調(diào)，17個(gè)下調(diào)；其中上調(diào)2倍

3、以上的有19個(gè)，下調(diào)大于2倍的有2個(gè)。熒光定量 RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果：miR-93、miR-106b、miR-494、miR-152、miR-191和miR-199a在感染1月實(shí)驗(yàn)組小鼠肝內(nèi)的相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組和正常組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在感染3月實(shí)驗(yàn)組小鼠肝內(nèi)的相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組和正常組比較均顯著增高（P<0.05）；而miR-494和miR-191在感染6月的相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組和正常組比較顯著增高（P<0.05），