小鼠miR-124a靶基因的初步篩選.pdf

1、MicroRNA是一類新發(fā)現(xiàn)的廣泛存在于多細(xì)胞生物中的非編碼RNA，長(zhǎng)度約為19～25nt，簡(jiǎn)稱為miRNA。MiRNA通過與靶mRNA特異性堿基的配對(duì)引起靶mRNA的降解或者翻譯的抑制，從而對(duì)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)調(diào)控，是近年來生物學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。MiR-124a是一種神經(jīng)系統(tǒng)系統(tǒng)特異的miRNA，在各物種中高度保守，有文獻(xiàn)報(bào)道，它可能參與中樞神經(jīng)發(fā)育的調(diào)控，但其作用機(jī)制還不清楚。本論文中，我們主要利用CHO細(xì)胞系來篩選小鼠miR-1

2、24a可能的靶基因。 首先我們利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)了小鼠miR-124a可能的靶基因，在結(jié)果中選擇那些主要在大腦表達(dá)的基因作為后面實(shí)驗(yàn)的對(duì)象。綜合生物信息軟件預(yù)測(cè)和小鼠腦部基因的表達(dá)情況，我們初步選定NM_011203、M_007556、NM_007615、NM_153088、NM_009498、NM_008055、NM_031877、NM_019660、NM_011244、NM_007678、NM_008028、NM_01

3、8780這12個(gè)基因作為后續(xù)的篩選基因。利用PCR的方法將這些候選基因的3'UTR擴(kuò)增出來，接入熒光素酶報(bào)告基因后面，與表達(dá)miR-124a的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)CHO細(xì)胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miR-124a可使與Ctdsp1、vamp33和Cebpa的3'UTR融合的報(bào)告基因的表達(dá)水平明顯F降，說明Ctdsp1、vamp3和Cebpa可能是miR-124a的靶基因。 其次，我們利用Western blot方法檢測(cè)了CHO細(xì)胞中miR-12