小鼠miR-124a靶基因的初步篩選.pdf

1、MicroRNA是一類新發(fā)現(xiàn)的廣泛存在于多細胞生物中的非編碼RNA，長度約為19～25nt，簡稱為miRNA。MiRNA通過與靶mRNA特異性堿基的配對引起靶mRNA的降解或者翻譯的抑制，從而對基因進行轉錄后的表達調控，是近年來生物學研究的熱點之一。MiR-124a是一種神經系統(tǒng)系統(tǒng)特異的miRNA，在各物種中高度保守，有文獻報道，它可能參與中樞神經發(fā)育的調控，但其作用機制還不清楚。本論文中，我們主要利用CHO細胞系來篩選小鼠miR-1

2、24a可能的靶基因。 首先我們利用生物信息學軟件預測了小鼠miR-124a可能的靶基因，在結果中選擇那些主要在大腦表達的基因作為后面實驗的對象。綜合生物信息軟件預測和小鼠腦部基因的表達情況，我們初步選定NM_011203、M_007556、NM_007615、NM_153088、NM_009498、NM_008055、NM_031877、NM_019660、NM_011244、NM_007678、NM_008028、NM_01

3、8780這12個基因作為后續(xù)的篩選基因。利用PCR的方法將這些候選基因的3'UTR擴增出來，接入熒光素酶報告基因后面，與表達miR-124a的質粒共轉CHO細胞。結果發(fā)現(xiàn)，過表達miR-124a可使與Ctdsp1、vamp33和Cebpa的3'UTR融合的報告基因的表達水平明顯F降，說明Ctdsp1、vamp3和Cebpa可能是miR-124a的靶基因。 其次，我們利用Western blot方法檢測了CHO細胞中miR-12