自制顆粒酶B兔多克隆抗體用途及脾臟各部分主要免疫細胞組成檢測.pdf

1、背景：
　　顆粒酶B（granzyme B）是一種絲氨酸蛋白酶，殺傷細胞（NK細胞或者CTL細胞）分泌的穿孔素在靶細胞上“打孔”，顆粒酶B通過穿孔素打的“孔”進入靶細胞對靶細胞造成損傷。目前發(fā)現(xiàn)人的顆粒酶B全長分子量為32kDa，本課題組前期實驗和他人實驗均發(fā)現(xiàn)另外一種分子量的顆粒酶B：35kDa顆粒酶B。進一步研究表明兩種形式的顆粒酶B定位及功能存在差異，商品化抗體不能滿足這方面的研究，因此有必要自制抗體研究其功能及定位。

2、>　　脾臟是機體最大的免疫器官，其免疫細胞的變化可反映全身的免疫反應(yīng)。其取材方便、細胞數(shù)多、可用于多個實驗，如免疫組化、PCR、流式、免疫熒光等。因此，在實驗中通常將部分脾臟代替整個脾臟進行某種實驗，但缺乏相關(guān)的實驗依據(jù)。本論文第二部分旨在為實際的實驗操作提供一些理論支持。
　　目的：
　?。?）探索自制抗血清是否能檢測人的32kDa和35kDa顆粒酶B，其是否適用于多種實驗方法。
　?。?）脾臟各部分主要免疫細胞的比

3、例是否存在差異。
　　方法：
　?。?）利用蛋白印跡、免疫組織化學(xué)、免疫熒光、免疫細胞化學(xué)法，使用抗血清檢測顆粒酶B并摸索其合適的使用濃度。
　?。?）取C57和bm12小鼠脾臟，按脾臟的長軸將其均分為三部分，流式細胞術(shù)檢測各部分主要免疫細胞的組成。
　　結(jié)果：
　?。?）抗血清可以檢測人的32kDa和35kDa的顆粒酶B；可用于做western blot、免疫組化法，其最佳使用濃度分別為1:4000、1: