二十二碳六烯酸對(duì)裸鼠結(jié)腸癌移植瘤基因表達(dá)譜影響研究.pdf

1、背景:已有的研究表明,二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid, DHA)對(duì)于前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有抑制作用。結(jié)腸癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)DHA對(duì)結(jié)腸癌和結(jié)腸癌細(xì)胞具有抑制或殺傷作用,但具體機(jī)制尚不明確。
　　目的:應(yīng)用新型分子生物學(xué)手段,全面闡明DHA在抑制結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制,并為DHA新型抗癌藥物的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:裸鼠皮下植入人

2、結(jié)腸癌HCT-15細(xì)胞,建立人結(jié)腸癌裸鼠動(dòng)物模型,分別喂養(yǎng)含DHA的飼料和正常飼料。8周后,觀察DHA對(duì)裸鼠結(jié)腸癌移植瘤生長(zhǎng)的影響;采用人表達(dá)譜芯片方法比較喂食含DHA的飼料和正常飼料的裸鼠結(jié)腸癌移植瘤基因表達(dá)譜的差異,采用生物信息學(xué)方法差異表達(dá)的基因功能以及涉及的信號(hào)通路;挑選部分差異表達(dá)基因,應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR

3、)方法,在裸鼠動(dòng)物模型和細(xì)胞水平上驗(yàn)證上述表達(dá)譜芯片結(jié)果。
　　結(jié)果:1)與喂養(yǎng)正常飼料的人結(jié)腸癌裸鼠相比,喂養(yǎng)含有 DHA飼料的裸鼠結(jié)腸癌移植瘤瘤塊體積明顯降低,通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)印證了DHA抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用;2)表達(dá)譜芯片檢測(cè)共篩選得到2073個(gè)差異表達(dá)基因(以差異2倍以上為標(biāo)準(zhǔn)確定差異表達(dá)基因)。與對(duì)照組相比,喂食含DHA的飼料的瘤體中967個(gè)基因表達(dá)上調(diào),1106個(gè)基因表達(dá)下調(diào);其中表達(dá)差異較大的基因包括是基質(zhì)Gla蛋白(ma

4、trix Gla protein)、免疫球蛋白κ(immunoglobulin kappa)相關(guān)蛋白、轉(zhuǎn)錄起始因子 TFIID相關(guān)蛋白(Transcription initiation factor TFIID subunit11)等基因;3)生物信息學(xué)表明上調(diào)表達(dá)的基因主要影響分子結(jié)合、酶分子結(jié)合、底物特異性轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞骨架蛋白等;下調(diào)表達(dá)的基因涉及轉(zhuǎn)運(yùn)活性、受體結(jié)合、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)活性、底物特異性轉(zhuǎn)運(yùn)活性、結(jié)構(gòu)分子活性、底物特異性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)活

5、性、離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)活性、同種蛋白結(jié)合、蛋白二聚化活性、鈣離子結(jié)合、序列特異性 DNA結(jié)合等。4)選取部分差異基因進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng),結(jié)果表明,在裸鼠移植瘤水平和體外細(xì)胞水平,喂養(yǎng)含DHA飼料或添加 DHA均導(dǎo)致環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase2, COX2)、低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子-A(vascular endothelial gro

6、wth factor-A, VEGF-A)、軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(cartilage oligomeric matrix protein, COMP)、基質(zhì)金屬蛋白酶-1(matrix metalloproteinases-1, MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9, MMP-9)、固醇攜帶蛋白2(sterol sarlier protein2, SCP2)、多配體蛋白聚糖3(syndec