含P450的魚肝臟S-9部分對(duì)酪胺合成章胺的促進(jìn)作用.pdf

1、本文主要研究了魚露中腎上腺素受體激動(dòng)劑-章胺及其前體化合物酪胺檢測(cè)方法的和含P450的魚肝臟S-9部分對(duì)酪胺合成章胺的作用。 首先采用液相色譜方法，是將魚露用流動(dòng)相稀釋100倍，然后經(jīng)微孔濾膜（0.45μm）濾過；色譜條件是色譜柱：phenomenex luna C18（150×4.60mm，5μm），流動(dòng)相：0.02mol.L-1檸檬酸-0.02mol.L-1磷酸二氫鈉（7：3），pH調(diào)為3，流速：1.0mL.min-1，紫外

2、檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm，進(jìn)樣體積：10μL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，此方法章胺在0.0057～50μg·mL。1范圍內(nèi)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.9991），平均加樣回收率為104.4％，RSD為1.53％。最低檢出濃度為5.7ng.mL-1。此HPLC檢測(cè)方法不需要衍生處理，樣品用量少，可直接上機(jī)測(cè)定，具有良好的專一性，精密度和回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，具有微量、簡(jiǎn)便、快捷、靈敏等特點(diǎn)，能符合測(cè)定的要求。 其次，我們從魚肝臟

3、中分離含P450的S-9部分，并測(cè)定其中P450的含量。草魚剪斷鰓弓，盡量放出血液，迅速打開腹腔，取出肝臟，用0.1mol·L緩沖液（pH7.4）洗凈表面血污，稱肝重。將肝臟剪碎，用上述緩沖液洗2次，充分去除肝臟血液。取肝重20g，加60 ml勻漿緩沖液，在冰浴中用組織勻漿機(jī)制成勻漿；4℃下10000 g離心20 min，過濾，上清夜用四層紗布過濾，上清夜即為S-9部分。依據(jù)Omura和Sato方法的原理，肝臟S-9部分樣品用懸浮緩沖液

4、稀釋12倍，加入少量Na2 S2O4，等量分裝到兩個(gè)比色杯中，分別作為對(duì)照和樣本，于樣本池中比色杯充一氧化碳30 S，紫外分光光計(jì)掃描400-500 nm波段。計(jì)算公式如下： CYP450（nmol/mg肝臟）=[A（450-490）×1000]/（91×C）其中，A（450-490）為450 nm和490 nm的吸收度之差，C為被測(cè)樣品的魚肝臟的濃度（mg/ml）。 我們研究了三種緩沖液體對(duì)P450含量的影響，比較了

5、草魚和鰱魚肝臟中P450的含量，經(jīng)過對(duì)-25℃，4℃兩個(gè)不同溫度下貯藏的穩(wěn)定檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在4℃冷藏條件下，P450一天基本全部失活，-25℃冷凍條件下9天內(nèi)P450含量基本不變。 最后，我們對(duì)分離出來的魚肝臟S-9部分對(duì)章胺合成酪胺的作用進(jìn)行了研究。 我們用分離出來的魚肝臟S-9部分，加入0.1ml異煙肼，37度水浴中5分鐘，加入酪胺4.11mg，再加入Vc1mg，通氧氣60s，反應(yīng)1小時(shí)，經(jīng)HPLC測(cè)定生成了章胺。然后我