攜帶TIMP-3基因的重組腺病毒增加HPV陽性宮頸癌放療敏感性的體內外實驗研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　 細胞對細胞外基質成分（extracellular matrix，ECM）的降解是腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中最重要的分子事件，基質金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases MMPs)是一類最重要的執(zhí)行ECM降解的水解酶，多種腫瘤組織中都伴有MMPs的高表達?；|金屬蛋白酶組織抑制因子(tissue inhibitors ofmetalloproteinase TIMPs)是一類能特異性抑制MM

2、Ps功能的活性因子，對抑制腫瘤浸潤和轉移有重要功能。TIMP-3是TIMPs家族的新成員，由于它誘導腫瘤細胞凋亡和抑制血管形成的作用，使其在腫瘤治療中越來越受到重視。
　　 宮頸癌發(fā)病率在全球婦女惡性腫瘤中居第二位。本實驗室前期的有關體內外實驗研究證實Ad-TIMP-3可有效地治療宮頸癌：Ad-TIMP-3轉染可以強烈地誘導宮頸癌細胞的凋亡，并存在顯著的旁觀者效應；Ad-TIMP-3可引起CaSKi細胞的G2/M期阻滯；Ad-T

3、IMP-3和放療聯(lián)合使用可使療效明顯增強，起到效應相加或協(xié)同作用；對裸鼠宮頸癌皮下移植瘤用Ad-TIMP-3單獨瘤體內注射或與順鉑腹腔內注射聯(lián)合使用均顯示明顯抑制腫瘤生長。
　　 基于上述研究結果，本研究著重于TIMP-3增加HPV陽性宮頸癌放療敏感性方面的探討。以腺病毒為載體，將TIMP-3基因導入HPV陽性宮頸癌細胞HeLa-Luc和CaSki，分析TIMP-3對宮頸癌細胞的作用以及與放療聯(lián)合應用后的效果。
　　 方

4、法：
　　 應用RT-PCR法及Western Blot法檢測HeLa-Luc和CaSki細胞感染Ad-TIMP-3前后TIMP-3 mRNA及蛋白表達水平；MTT法驗證Ad-TIMP-3對HeLa-Luc和CaSki細胞增殖的抑制；平板克隆方法檢測Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合應用后對細胞生長的影響；體外侵襲及粘附實驗檢測Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合應用后對細胞侵襲、粘附能力的影響；裸鼠體內實驗了解Ad-TIMP-3與X射線

5、聯(lián)合應用后HeLa-Luc細胞體內致瘤性的變化。
　　 結果：
　　 RT-PCR和Western Blot證實TIMP-3在HeLa-Luc和CaSki兩種宮頸癌細胞系中均表達低下，而感染Ad-TIMP-3后TIMP-3表達水平明顯升高，Ad-TIMP-3感染HeLa-Luc和CaSki細胞前后TIMP-3的表達有明顯差異。MTT結果顯示Ad-TIMP-3能夠明顯抑制HeLa-Luc和CaSki細胞增殖，且具有劑量效應

6、關系。平板克隆方法顯示Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合應用可顯著減少平板克隆形成數。體外侵襲及粘附實驗顯示Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合應用后顯著減弱宮頸癌細胞的侵襲能力及粘附性。裸鼠體內實驗顯示Ad-TIMP-3與X射線聯(lián)合組HeLa-Luc細胞的體內致瘤性顯著下降。
　　 結論：
　　 Ad-TIMP-3抑制宮頸癌細胞增殖。與X射線聯(lián)合應用后，Ad-TIMP-3顯著提高宮頸癌細胞放療敏感性，抑制放療誘導的腫瘤細胞生長，