沉默GOLPH3對(duì)肝細(xì)胞癌化療敏感性影響的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是我國(guó)發(fā)生率與死亡率最高的惡性腫瘤之一;部分HCC患者在就診時(shí)往往已屬晚期，失去手術(shù)治療機(jī)會(huì)，且容易發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。肝細(xì)胞癌對(duì)化療藥物不敏感一直是治療肝細(xì)胞癌的難點(diǎn)。高爾基體磷蛋白3(Golgi phosphoprotein3，GOLPH3)主要定位在高爾基體外側(cè)網(wǎng)絡(luò)(TGN)，在細(xì)胞生理中起著重要的作用，主要在高爾基形態(tài)維持、囊泡運(yùn)輸、蛋白糖基化、受體

2、分配、線粒體功能等五個(gè)方面發(fā)揮作用。GOLPH3作為一種新的癌基因，由Kenneth L.Scott基于對(duì)人類癌癥的全基因組拷貝數(shù)的分析，發(fā)現(xiàn)5p13位點(diǎn)在多種類型的實(shí)體腫瘤，如肺癌，卵巢癌，乳腺癌，前列腺癌和黑色素瘤中，呈現(xiàn)明顯的擴(kuò)增趨勢(shì)。有研究報(bào)道腫瘤組織中GOLPH3高表達(dá)可以提高以5-Fu為基礎(chǔ)輔助化療的結(jié)直腸癌患者的預(yù)后效果，增加結(jié)直腸癌細(xì)胞中GOLPH3的表達(dá)也可以提高腫瘤細(xì)胞對(duì)5-Fu化療藥物的敏感性。但值得注意的是，有報(bào)

3、道沉默口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞GOLPH3表達(dá)可通過(guò)調(diào)節(jié)Caspase-3，Bcl-2和cytochrome-c的表達(dá)來(lái)提高化療效果
　　方法:應(yīng)用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)8株肝細(xì)胞癌細(xì)胞系(Huh7、BEL-7402、HCCLM3、HepG2、SMMC-7721、SKHEP1、MHCC97H、MHCC97L)和一株正常肝細(xì)胞細(xì)胞系（HL-7702）中GOLPH3在mRNA及蛋白水平的表達(dá)情況。選擇GOLPH3相對(duì)

4、高表達(dá)細(xì)胞系，使用siRNA構(gòu)建干擾的GOLPH3肝細(xì)胞癌細(xì)胞系，通過(guò)AnnexinⅤ-PI染色法，流式細(xì)胞儀檢測(cè)5-FU，ADM， Cyclophosphamide，OXA對(duì)肝細(xì)胞癌細(xì)胞化療藥物敏感性的影響。使用慢病毒感染的方式構(gòu)建穩(wěn)定的GOLPH3干擾的huh7細(xì)胞系，通過(guò)裸鼠體內(nèi)體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)GOLPH3在體內(nèi)環(huán)境下對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及化療藥物敏感性的影響。篩查與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因，探究GOLPH3影響肝細(xì)胞癌化療敏感性可能的分子機(jī)制

5、。
　　結(jié)果:通過(guò)RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)8株肝細(xì)胞癌細(xì)胞系(Huh7、BEL-7402、HCCLM3、HepG2、SMMC-7721、SKHEP1、MHCC97H、MHCC97L)中GOLPH3的mRNA及蛋白表達(dá)水平結(jié)果明顯高于正常肝細(xì)胞細(xì)胞系(HL-7702)，其中huh7和SMMC-7721呈現(xiàn)相對(duì)高表達(dá)。使用siRNA沉默huh7和SMMC-7721的GOLPH3表達(dá)，流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示GOLPH3

6、干擾組應(yīng)用5-FU，ADM，Cyclophosphamide，OXA后，其凋亡比例明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，兩組細(xì)胞凋亡能力差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用慢病毒感染的方式構(gòu)建穩(wěn)定的GOLPH3干擾的huh7細(xì)胞系后，通過(guò)裸鼠體內(nèi)成瘤發(fā)現(xiàn)，干擾GOLPH3組，肝細(xì)胞癌體內(nèi)成瘤速度明顯低于正常對(duì)照組，且使用化療藥物阿霉素后，干擾GOLPH3組的腫瘤抑制作用明顯強(qiáng)于對(duì)照組。
　　結(jié)論:干擾GOLPH3可增加5-FU、OXA、ADM、Cy