妊娠期糖尿病VCAM-1、AOPP的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、目的:妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是妊娠期特有的代謝性疾病，是導(dǎo)致母兒不良結(jié)局的主要原因之一。其發(fā)病機(jī)理迄今尚不十分明確，目前認(rèn)為多種因素導(dǎo)致的胰島素抵抗及胰島β細(xì)胞功能障礙是其主要的發(fā)病原因，而血管內(nèi)皮損傷是引起胰島素抵抗的核心環(huán)節(jié)。血管細(xì)胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)是免疫球蛋白超家族中的成員，是一類介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)

2、胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互結(jié)合，起黏附作用的膜表面糖蛋白，可介導(dǎo)白細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。晚期氧化蛋白產(chǎn)物(Advanced oxidation proteinproducts，AOPP)是氧化應(yīng)激對體內(nèi)各種蛋白質(zhì)氧化后形成的蛋白氧化終末產(chǎn)物，可介導(dǎo)脂質(zhì)過氧化，激活單核細(xì)胞和還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotide phosph

3、ate,NADPH)氧化酶，釋放細(xì)胞內(nèi)活性氧，誘發(fā)炎細(xì)胞因子及黏附分子的形成和釋放，引起全身微炎癥反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮。本研究通過測定妊娠期糖尿病患者VCAM-1、AOPP的表達(dá)水平，探討VCAM-1、AOPP在妊娠期糖尿病發(fā)生發(fā)展中的作用，及與妊娠期糖尿病病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性，進(jìn)而為妊娠期糖尿病的臨床診斷、預(yù)防及治療提供一定的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1研究對象:依據(jù)第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》妊娠合并糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選擇201

4、2-2至2013-12河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院收治的妊娠合并糖尿病患者60例作為研究組，其中妊娠期糖尿病(GDM)、糖尿病合并妊娠(diabetesmellitus，DM)患者各30例，同期隨機(jī)選取33例健康孕婦作為對照組。
　　2標(biāo)本采集:入院后治療前取空腹靜脈血6ml，室溫下2000rpm離心3ml血10分鐘，取上清液置于EP管中，保存于-70℃冰箱，用于血漿VCAM-1、AOPP濃度測定。另外3ml當(dāng)日檢測血脂及空腹血糖等指標(biāo)。

5、胎盤娩出后15min內(nèi)收取胎盤母體面近臍帶根部直徑3cm范圍內(nèi)的組織，約1cm3大小，生理鹽水沖洗后用濾紙吸干水分，在4％福爾馬林溶液中室溫固定24h，并進(jìn)行常規(guī)的脫水、石蠟包埋等。
　　3檢驗(yàn)指標(biāo):測定所有研究對象血中VCAM-1、AOPP、高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、載脂蛋白A(ApolipoproteinA，

6、APOA)、載脂蛋白B(ApolipoproteinB，APOB)、糖化血紅蛋白（hemoglobin A1c，HbA1c）及空腹血糖(Fastingblood glucose，F(xiàn)BG)的水平，并記錄年齡、分娩孕周、身高、體重、及血壓等指標(biāo)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定血漿AOPP、VCAM-1濃度;采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistr

7、y)顯微鏡下觀察胎盤中VCAM-1、AOPP表達(dá)并進(jìn)行圖像分析;血脂及空腹血糖等生化指標(biāo)送我院生化檢驗(yàn)室測定。
　　4數(shù)據(jù)分析:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料用百分率表示。對數(shù)據(jù)先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，多樣本間均數(shù)進(jìn)行比較采用方差分析，兩兩樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)，若方差不齊用t'檢驗(yàn);比較樣本率采用x2檢驗(yàn);兩變量之間的相互關(guān)系采用直線相關(guān)性分析（Pearson相關(guān)性分析）。P＜0.0

8、5為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1①GDM組和DM組的VCAM-1、AOPP水平與對照組相比均明顯升高(P＜0.05)，但GDM組和DM組相比無顯著性差異(P＞0.05)。②GDM組和DM組的入院時(shí)體重指數(shù)(body mass index，BMI)、新生兒出生體重、FBG、HbA1c、LDL及APOB水平與對照組相比均明顯升高(P＜0.05)，DM組與GDM組相比HbA1c明顯升高(P＜0.05)，其余指標(biāo)在兩組間無

9、顯著性差異(均P＞0.05)。③GDM組和DM組的HDL、APOA水平較對照組明顯降低（均P＜0.05），但GDM組和DM組相比無顯著差異(P＞0.05)。④對照組、GDM組和DM組間的孕前BMI沒有顯著性差異（均P＞0.05）。
　　2對照組孕婦血漿中VCAM-1、AOPP無明顯相關(guān)性（P＞0.05），VCAM-1、AOPP分別與孕前BMI、入院時(shí)BMI、FBG、HbA1c、HDL、LDL、APOA、APOB、新生兒出生體重均無

10、明顯相關(guān)性（均P＞0.05）。
　　3 GDM組血漿中VCAM-1、AOPP濃度呈正相關(guān)(r=0.406，P＜0.05)。①GDM組血漿中VCAM-1濃度與入院時(shí)BMI、HbA1c、FBG、LDL、APOB呈正相關(guān)(r=0.366，r=0.405，r=0.390，r=0.402，r=0.365，P＜0.05)，與HDL、APOA呈負(fù)相關(guān)（r=-0.366，r=-0.380，P＜0.05），與孕前BMI、新生兒出生體重?zé)o明顯相關(guān)性（

11、均P＞0.05）;②GDM組血漿中AOPP濃度與入院時(shí)BMI、HbA1c、FBG、LDL、APOB呈正相關(guān)（r=0.400，r=0.412，r=0.449，r=0.387，r=0.394，P＜0.05），與HDL、APOA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.385，r=-0.368，P＜0.05)，與孕前BMI、新生兒出生體重?zé)o明顯相關(guān)性（均P＞0.05）。
　　DM組孕婦血漿中VCAM-1、AOPP呈正相關(guān)(r=0.481，P＜0.05)。①D

12、M組血漿中VCAM-1與入院時(shí)BMI、HbA1c、FBG、LDL、APOB呈正相關(guān)（r=0.363，r=0.494，r=0.426，r=0.363，r=0.364，P＜0.05），與HDL、APOA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.364，r=-0.380，P＜0.05)，與孕前BMI及新生兒出生體重?zé)o明顯相關(guān)性（均P＞0.05）;②DM組血漿中AOPP濃度與入院時(shí)BMI、HbA1c、FBG、LDL、APOB呈正相關(guān)(r=0.389，r=0.566，

13、r=0.436，r=0.433，r=0.416，P＜0.05)，與HDL、APOA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.407，r=-0.393，P＜0.05)，與孕前BMI、新生兒出生體重?zé)o明顯相關(guān)性(均P＞0.05)。
　　4 GDM組和DM組發(fā)生肥胖及巨大兒的比例較對照組明顯升高(P＜0.05)，及DM組發(fā)生巨大兒的比例較GDM組明顯增高(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但發(fā)生肥胖的比例在GDM組和DM組無顯著性差異(P＞0.05)。

14、>　　5 HE染色結(jié)果:對照組胎盤絨毛成熟良好，絨毛及絨毛間質(zhì)的血管形態(tài)正常，絨毛最表層為細(xì)胞核排列較整齊的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞;GDM組與DM組患者胎盤絨毛成熟不良，絨毛血管壁增厚及絨毛閭質(zhì)毛細(xì)血管充盈，絨毛表層的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞細(xì)胞核排列紊亂。
　　6免疫組化染色結(jié)果:VCAM-1、AOPP在三組孕婦胎盤中均有表達(dá)。VCAM-1主要表達(dá)于胎盤絨毛表層的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞上，為胞漿著色。GDM組和DM組胎盤中VCAM-1的平均

15、光密度值與對照組相比均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），GDM組和DM組相比無明顯差異（P＞0.05），且在對照組、GDM組、DM組三組中血漿VCAM-1水平與胎盤組織中VCAM-1平均光密度值呈正相關(guān)(r=0.429，r=0.483，r=0.484，P＜0.05)。AOPP主要表達(dá)于胎盤的滋養(yǎng)層細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞上，為胞漿著色。GDM組和DM組胎盤中AOPP的平均光密度值與對照組相比均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.

16、05），GDM組和DM組相比無明顯差異(P＞0.05)，且在對照組、GDM組、DM組三組中血漿AOPP水平與胎盤組織中AOPP平均光密度值呈正相關(guān)(r=0.749，r=0.840，r=0.824，P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1妊娠期糖尿病患者血漿中VCAM-1、AOPP濃度較對照組孕婦顯著升高，提示與妊娠期糖尿病的發(fā)病過程相關(guān)，同時(shí)也說明血管內(nèi)皮損傷在妊娠期糖尿病病理變化中起重要作用。
　　2妊娠期糖尿病患者血漿

17、中VCAM-1、AOPP的水平與FBG、HbA1c的水平相關(guān)，說明VCAM-1、AOPP與妊娠期糖尿病病情的嚴(yán)重程度相關(guān)。
　　3妊娠期糖尿病患者血漿中VCAM-1、AOPP的水平與HDL、LDL、APOA、APOB的水平相關(guān)，進(jìn)一步說明了血管內(nèi)皮損傷在妊娠期糖尿病疾病的發(fā)生發(fā)展中起至關(guān)重要的作用。
　　4免疫組化顯示VCAM-1、AOPP在妊娠期糖尿病患者胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)較對照組明顯增高，說明妊娠期糖尿病患者胎盤中VCA