重組融合蛋白Ph-PA對(duì)綠膿桿菌體內(nèi)體外抗菌活性的初步研究.pdf

1、綠膿桿菌是臨床上常見的機(jī)會(huì)性革蘭陰性致病桿菌，常感染燒傷病人、癌癥患者等免疫力低下的人群，由于綠膿桿菌只對(duì)非常有限的數(shù)種抗生素敏感，對(duì)其感染的治療常很困難，由該菌引起的菌血癥、肺炎、心內(nèi)膜炎和骨髓炎的死亡率都比其它致病菌高。對(duì)綠膿桿菌的治療通常需要聯(lián)合用藥，但是仍然不能避免耐藥的發(fā)生，耐藥綠膿桿菌特別是多重耐藥綠膿桿菌(mutildrug-resistant Pseudomonas acruginosa，MDRPA)的出現(xiàn)正嚴(yán)重威脅著人

2、類健康，因此迫切地需要發(fā)展新型的抗菌素。 大腸菌素Ia是大腸桿菌分泌的一種多肽類細(xì)菌素，可識(shí)別同種異株的大腸桿菌并在菌膜上形成致死性離子通道而殺死細(xì)菌。這種殺傷方式非常有效，當(dāng)大腸菌素的濃度等于甚至小于0.1nmol時(shí)仍然能實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌的有效攻擊，丘小慶等利用金黃色葡萄球菌信息素AgrD分子能自主尋找生存環(huán)境中同種菌體細(xì)胞膜上受體的生物學(xué)特性，通過將金黃色葡萄球菌信息素AgrD1的N-端和大腸菌素Ia C．端相連構(gòu)建了抗金黃色葡萄

3、球菌工程多肽(Pheromonicin-SA，Ph-SA)，在體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)中，Ph-SA對(duì)金黃色葡萄球菌特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出了強(qiáng)大的殺傷作用，按照相同分子量進(jìn)行標(biāo)化，其體內(nèi)效果強(qiáng)于苯唑西林500余倍。在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，丘小慶等將AgrD1的C-端與大腸菌素Ia的N-端相連接，發(fā)現(xiàn)該融合多肽雖不能抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)，卻對(duì)綠膿桿菌特別是臨床分離多重耐藥株表現(xiàn)出強(qiáng)于野生型大腸菌素和Ph-SA的殺傷作用。故該融合多肽被命名為P

4、heromonicin-Pseudomonas aeruginosa(Ph-PA)。 本研究將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌TG1工程菌中，經(jīng)增殖、破菌和提取上清后，經(jīng)離子交換純化后獲得Ph-PA。體外抗菌實(shí)驗(yàn)中，采用了微量稀釋法檢測(cè)了Ph-PA對(duì)臨床分離株(分別為頭孢他啶敏感株和頭孢他啶耐藥株)的最小抑菌濃度(MIC)，并比較了Ph-PA與頭孢他啶、哌拉西林、左氧氟沙星、慶大霉素等的抗菌活性差異。在體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)中，建立了小鼠全身感染模

5、型，觀察了Ph-PA．及對(duì)照藥物對(duì)小鼠的保護(hù)作用，并繪制出生存曲線圖。 結(jié)果表明：體外抗菌實(shí)驗(yàn)中，Ph-PA對(duì)綠膿桿菌的抗菌作用表現(xiàn)為劑量相關(guān)性，是一種殺菌劑，對(duì)臨床分離頭孢他啶敏感株和頭孢他啶耐藥株的最小抑菌濃度間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Ph-PA對(duì)綠膿桿菌的抗菌作用具有相對(duì)的靶向特異性。與現(xiàn)有常用抗生素相比Ph-PA表現(xiàn)出了更強(qiáng)大的抗菌作用，以最小抑菌濃度4 μ g/ml計(jì)算，按照相同分子量進(jìn)行比較，Ph-PA的抗菌活性是頭孢他啶的2

6、20倍，哌拉西林的2200倍，左氧氟沙星的85倍，慶大霉素的150倍。與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果類似，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，Ph-PA也表現(xiàn)出了強(qiáng)大的抗菌活性，在現(xiàn)有抗生素的臨床用藥量范圍內(nèi)，Ph-PA更是表現(xiàn)出了強(qiáng)于現(xiàn)有抗生素的體內(nèi)抗菌活性，特別是對(duì)多重耐藥臨床分離株，按照相同分子量進(jìn)行比較，Ph-PA的體內(nèi)保護(hù)作用是頭孢他啶的1100倍，哌拉西林的2300倍，左氧氟沙星的280倍，阿米卡星的440倍。綜上所述，Ph-PA是一種具有開發(fā)潛力的新型抗菌素前