替加環(huán)素對(duì)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抗菌活性和防耐藥突變研究.pdf

1、目的:測(cè)定替加環(huán)素對(duì)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(MDR-AB)的最低抑菌濃度(MIC),并在此基礎(chǔ)上應(yīng)用 Monte-Carlo模擬進(jìn)行 PK/PD研究,評(píng)價(jià)不同劑量替加環(huán)素治療MDR-AB肺炎效果。評(píng)價(jià)替加環(huán)素聯(lián)合多粘菌素E或舒巴坦對(duì)MDR-AB的抗菌效應(yīng);研究質(zhì)子泵抑制劑(PPIs)對(duì)替加環(huán)素體外抗菌活性的影響?；谀退幫蛔冞x擇窗(MSW)理論,測(cè)定替加環(huán)素單用及聯(lián)合多粘菌素 E或舒巴坦限制MDR-AB耐藥發(fā)生的能力,初步探究MDR-AB

2、對(duì)替加環(huán)素的耐藥機(jī)制。
　　方法:(1)采用瓊脂平板二倍稀釋法測(cè)定替加環(huán)素對(duì)135株MDR-AB的MIC,并結(jié)合410例肺炎患者的替加環(huán)素藥代學(xué)數(shù)據(jù),通過Monte-Carlo模擬計(jì)算不同劑量替加環(huán)素時(shí)AUC/MIC值分布,再根據(jù)預(yù)設(shè)折點(diǎn)計(jì)算治療MDR-AB肺炎的累積反應(yīng)分?jǐn)?shù)(CFR)。(2)參照棋盤法設(shè)計(jì),采用微量肉湯稀釋法測(cè)定替加環(huán)素與多粘菌素E、舒巴坦對(duì)70株MDR-AB的聯(lián)合MIC,計(jì)算聯(lián)合抑菌指數(shù)(FICI)并判定聯(lián)合效

3、應(yīng)。(3)采用瓊脂平板二倍稀釋法測(cè)定替加環(huán)素單藥及聯(lián)合PPIs對(duì)6種臨床常見分離菌的MIC;采用菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定替加環(huán)素單藥及聯(lián)合PPIs的體外殺菌曲線。(4)采用瓊脂平板二倍稀釋法測(cè)定替加環(huán)素、多粘菌素E及舒巴坦對(duì)30株MDR-AB的MIC和防耐藥突變濃度(MPC),計(jì)算選擇指數(shù)(SI=MPC/MIC);隨機(jī)選取9株細(xì)菌,測(cè)定替加環(huán)素聯(lián)合用藥的MPC,計(jì)算SI。(5)測(cè)定替加環(huán)素單藥及聯(lián)合碳酰氰間氯苯腙(CCCP)對(duì)體外篩選耐藥突變菌株

4、的MIC;利用RT-PCR技術(shù)測(cè)定耐藥突變菌株外排泵基因AdeB和AdeJ的相對(duì)表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1)135株MDR-AB中97％的菌株對(duì)替加環(huán)素敏感,3%中介,未發(fā)現(xiàn)耐藥菌株。以CFR≥90%為預(yù)設(shè)折點(diǎn),Monte-Carlo模擬分析表明,推薦給藥劑量(50 mg/L q12h)的CFR為61.62%,低于折點(diǎn)值;給藥劑量為100mg q12h時(shí),CFR為89.86%,接近折點(diǎn)值。(2)聯(lián)合用藥后,替加環(huán)素對(duì) MDR-AB

5、的 MIC50顯著下降,70株MDR-AB的FICI分布為:與多粘菌素E聯(lián)用時(shí),FICI≤0.5占4.3%,0.52為0;與舒巴坦聯(lián)用時(shí), FICI≤0.5占10%,0.52為0。(3)培養(yǎng)基中加入5-10 mg/L的PPIs會(huì)使細(xì)菌對(duì)替加環(huán)素MIC50增高

6、0-2倍;加入50 mg/L PPIs,細(xì)菌MIC50增加4->128倍。加入PPIs后的殺菌曲線均位于單藥殺菌曲線上方,表明各時(shí)間點(diǎn)菌落計(jì)數(shù)較單藥出現(xiàn)不同程度增高。(4)替加環(huán)素對(duì)MDR-AB的MPC值為4-32 mg/L,SI范圍為4-64;聯(lián)合4 mg/L多粘菌素E后SI下降2-4倍,聯(lián)合8 mg/L后SI下降4-8倍;聯(lián)合32 mg/L舒巴坦后SI下降2-8倍;聯(lián)合64 mg/L舒巴坦SI后下降4-64倍。(5)聯(lián)合CCCP后,

7、原菌株MIC并無變化,除AB10號(hào)突變菌株外,其他4株MIC下降了16-128倍。5株耐藥突變菌株外排泵基因AdeJ的表達(dá)量較原菌株相比均未見明顯增高,除AB10號(hào)突變菌株外,其余突變菌外排泵基因AdeB表達(dá)量增高2倍以上。
　　結(jié)論:(1)雖然 MDR-AB對(duì)替加環(huán)素敏感率較高,但 Monte-carlo模擬分析表明推薦給藥劑量對(duì)MDR-AB肺炎的療效并不理想。(2)替加環(huán)素與多粘菌素E聯(lián)用對(duì)MDR-AB以無關(guān)作用為主,與舒巴坦