耐藥性嗜麥芽窄食單胞菌和綠膿桿菌噬菌體初步應(yīng)用研究.pdf

1、目的:嗜麥芽窄食單胞菌是一種常見的條件致病菌，由于其能定殖在呼吸道上皮細(xì)胞和醫(yī)療設(shè)備表面使其很容易感染免疫力低下患者，嗜麥芽窄食單胞菌所導(dǎo)致的感染以呼吸道感染最為常見。銅綠假單胞桿菌也是臨床上最常見的條件致病菌之一，兩類細(xì)菌對(duì)多類抗生素具有固有耐藥性，它們的院內(nèi)感染對(duì)人類健康特別是免疫力低下患者造成重大威脅。
　　本研究就目前嗜麥芽窄食單胞菌和銅綠假單胞桿菌的嚴(yán)重耐藥性現(xiàn)狀，分別利用臨床分離的多重耐藥嗜麥芽窄食單胞菌SMA2和銅綠

2、假單胞桿菌Pa44，從醫(yī)院污水中分離到可裂解SMA2的噬菌體IME13、IME15以及Pa44的噬菌體Pa27P1，分析它們的生物學(xué)特性，并構(gòu)建SMA2免疫抑制Balb/c小鼠肺部感染治療模型、Pa44腹腔感染小鼠模型及其治療模型。
　　方法:以臨床分離的耐藥性嗜麥芽窄食單胞菌SMA2和銅綠假單胞桿菌Pa44為指示菌，利用噬斑法從醫(yī)院污水中分離噬菌體;利用雙層平板培養(yǎng)法測(cè)定噬菌體效價(jià)、最佳感染復(fù)數(shù)及一步生長(zhǎng)曲線等生物學(xué)特性;蛋白酶

3、K/SDS法提取噬菌體IME13、IME15基因組并用454測(cè)序儀測(cè)定噬菌體全基因組序列。
　　用滴鼻法給小鼠肺部感染最小致死量的嗜麥芽窄食單胞菌SMA2，感染后分別用嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體IME13、IME15經(jīng)滴鼻方式進(jìn)行治療，記錄小鼠死亡率和噬菌體的治療效果。利用腹腔注射的方法建立小鼠的銅綠假單胞桿菌Pa44全身感染模型。應(yīng)用篩選出的噬菌體Pa27P1分不同時(shí)間點(diǎn)和不同治療劑量經(jīng)腹腔注射對(duì)腹腔感染耐藥性銅綠假單胞菌Pa44的

4、Balb/c小鼠進(jìn)行治療，觀察噬菌體的治療效果。
　　結(jié)果:成功分離出2株嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體IME13、IME15，其中IME13具有獨(dú)特的噬斑形態(tài)和多達(dá)3100的爆發(fā)量，IME15是第一株T7類嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體;成功分離出銅綠假單胞桿菌噬菌體近90株，并篩選出5株相對(duì)廣譜的Pa3P1、Pa4P5、Pa12P1、Pa20P5和Pa28P2，這五株噬菌體的組合在體外能裂解所有18株銅綠假單胞桿菌。
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明噬

5、菌體IME13和IME15對(duì)于嗜麥芽窄食單胞菌SMA2導(dǎo)致的肺部感染具有較好的治療效果，噬菌體Pa27P1對(duì)于銅綠假單胞桿菌Pa44導(dǎo)致的全身感染和肺部感染具有較好的治療效果，在感染后及時(shí)進(jìn)行噬菌體治療對(duì)于降低小鼠死亡率有一定意義。結(jié)論:隨著嗜麥芽窄食單胞菌和銅綠假單胞桿菌耐藥性和對(duì)免疫抑制患者的致病性日趨嚴(yán)重，積極探索不依賴抗生素的治療方法勢(shì)在必行。研究結(jié)果表明利用醫(yī)院廢水分離噬菌體并用于治療細(xì)菌感染性疾病的方法是可行的，有望為細(xì)菌感