硫化氫對oxLDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞Lp-PLA2表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：
　　隨著目前人們生活水平的改善，醫(yī)療水平的提高，社會老齡化的趨勢更加明顯，動脈粥樣硬化（atherosclerosis，As）的發(fā)病率也呈現(xiàn)出上升的趨勢。有研究顯示炎癥因子在 As發(fā)病過程中起著重要的作用，在預(yù)防 As的發(fā)生、發(fā)展過程中也有十分重要的意義。本研究探討硫化氫（Hydrogen sulfide，H2S）對oxLDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中脂蛋白相關(guān)性磷脂酶A2（Lipoprotein-associated phos

2、pholipase A2， Lp-PLA2）表達(dá)的影響以及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　方法：
　　1、THP-1細(xì)胞分別經(jīng)不同濃度（0、25、50、100、200μg/mL）、不同時間（0、6、12、24、48h）oxLDL孵育選取最佳的處理濃度和時間，采用Western-blot方法檢測Lp-PLA2蛋白的表達(dá)。
　　2、THP-1分別經(jīng)不同濃度（25、50、100、200μmmol/L）、不同時間（6、12、24、48

3、h）NaHS聯(lián)合oxLDL（50μg/mL）共同孵育選取最佳濃度和時間，采用Western-blot檢測Lp-PLA2蛋白的表達(dá)。
　　3、分別用0.1μmol/L的SB203580（p38 MAPK的特異性抑制劑）、NaHS和PPG（CBS特異性抑制劑）預(yù)孵育2小時后按照PPG+SB203580組、NaHS組、PPG組、SB203580組、空白組與oxLDL共同孵育24h，來探討H2S對oxLDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中Lp-PLA2表達(dá)

4、影響的機(jī)制，分別采用Western-blot檢測Lp-PLA2蛋白的表達(dá)、cayman酶活性檢測試劑盒檢測Lp-PLA2活性。
　　4、預(yù)先用佛波酯誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞72h貼壁，然后分別用SB203580（0.1μmol/L）、NaHS和PPG預(yù)孵育2小時最后按照、PPG+SB203580組、NaHS組、PPG組、SB203580組、空白組與oxLDL共同孵育24h，分別采用油紅O檢測巨噬細(xì)胞內(nèi)荷脂情況。
　　結(jié)果：

5、　　1.與對照組相比，oxLDL呈劑量和時間依賴性上調(diào)Lp-PLA2蛋白的表達(dá)，以200μg/mL濃度組上調(diào)最明顯(P<0.01)，但50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），故選取50μg/mL為最佳處理濃度。48h組細(xì)胞Lp-PLA2蛋白的表達(dá)上調(diào)最明顯(P<0.01)，較但24h和48h組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）選取24h為最佳處理時間。
　　2.與25μmmol/L的

6、NaHS處理組細(xì)胞相比，NaHS（50，100，200μmmol/L）能下調(diào)oxLDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中Lp-PLA2蛋白的表達(dá)呈劑量和時間依賴性，以200μmmol/L濃度組下調(diào)最明顯(P<0.01)，但100μmmol/L和200μmmol/L組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），選取100μmmol/L為最佳處理濃度。以48h組細(xì)胞Lp-PLA2蛋白的表達(dá)上調(diào)最明顯(P<0.01)，但24h和48h組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）

7、選取24h為最佳處理時間。
　　3.與oxLDL（50μg/mL）組相比，采用SB203580、NaHS、PPG+SB203580預(yù)孵育2小時后，能使oxLDL誘導(dǎo)Lp-PLA2蛋白表達(dá)及Lp-PLA2的酶活性明顯下調(diào)（P<0.01），但Lp-PLA2蛋白表達(dá)及Lp-PLA2的酶活性在SB203580+oxLDL組、NaHS+oxLDL組和PPG+oxLDL+SB203580組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
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