IRTKS在肝癌中的作用研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)大規(guī)?；蛐酒Y選，發(fā)現(xiàn)IRTKS在肝癌中表達(dá)上調(diào)。本課題主要研究IRTKS基因的生物學(xué)功能以及與肝癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　方法:構(gòu)建IRTKS基因的真核和原核表達(dá)載體，采用熒光定量PCR技術(shù)分析IRTKS基因在肝癌等腫瘤組織中的表達(dá)水平;觀察IRTKS的過(guò)表達(dá)以及Knock-down對(duì)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、克隆形成能力以及低糖環(huán)境下克隆形成能力的影響;采用免疫熒光、細(xì)胞劃痕、transwell技術(shù)觀察IRTKS對(duì)

2、肝癌細(xì)胞遷移能力的影響;通過(guò)免疫共沉淀、亞細(xì)胞共定位以及GSTpull-down技術(shù)分析鑒定IRTKS的相互作用蛋白ASPP2;利用免疫熒光、免疫共沉淀、免疫印跡技術(shù)研究IRTKS對(duì)胰島素刺激的反應(yīng)性及其信號(hào)通路的影響。
　　結(jié)果:熒光定量PCR的結(jié)果顯示IRTKS基因在33.8％的肝癌樣本中表達(dá)上調(diào)2倍以上。IRTKS的表達(dá)下調(diào)可以抑制Hep3B和YY-8103等肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及克隆形成，抑制YY-8103和MHCC-H細(xì)胞的軟

3、瓊脂克隆形成，抑制YY-8103細(xì)胞的體外遷移能力，對(duì)于Hep3B和YY-8103細(xì)胞在低糖環(huán)境下的克隆形成生長(zhǎng)具有保護(hù)作用另一方面，IRTKS的過(guò)表達(dá)可以促進(jìn)SK-hep-1和WRL-68等肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、克隆形成、軟瓊脂克隆形成及體外遷移能力，對(duì)于在低糖環(huán)境下的克隆形成生長(zhǎng)也具有保護(hù)作用;通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)IRTKS與凋亡刺激因子ASPP2具有相互作用;在胰島素的刺激下，IRTKS的磷酸化水平出現(xiàn)升高并呈現(xiàn)時(shí)間相關(guān)性;IRTKS