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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:為了驗(yàn)證特立氟胺的抗腫瘤作用,本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了特立氟胺對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的增殖、周期、凋亡等細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn),并通過(guò)基因芯片來(lái)分析特立氟胺對(duì)lncRNA和mRNA表達(dá)譜的影響,從而探討特立氟胺的抗腫瘤作用的機(jī)制。
方法:培養(yǎng)肝癌細(xì)胞SMMC-7721并實(shí)施細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)如增殖、周期、凋亡等。為了研究特立氟胺的作用機(jī)制,我們采用基因芯片分析lncRNA及mRNA表達(dá)譜的影響,并通過(guò)GO分析及pathway分析分析與之相關(guān)的
2、基因和通路。
結(jié)果:
1.特立氟胺影響肝癌細(xì)胞的增殖
本實(shí)驗(yàn)采用CCK8法分別測(cè)定經(jīng)過(guò)特立氟胺處理過(guò)的細(xì)胞以及正常對(duì)照組細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果表明,特立氟胺具有明顯的抑制肝癌細(xì)胞增殖作用,而且這種作用呈時(shí)間及濃度依賴性。
2.特立氟胺降低肝癌細(xì)胞的克隆形成能力
特立氟胺可明顯抑制肝癌細(xì)胞的克隆形成能力,這種抑制作用在25uM及50uM濃度時(shí)表現(xiàn)明顯,在100uM濃度時(shí)表現(xiàn)出完全的抑制作用。
3、
3.特立氟胺可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡
特立氟胺可以明顯促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡且有明顯的濃度依賴性。特立氟胺藥物作用48小時(shí)以后,在濃度梯度為25uM,50uM,100uM、200uM時(shí),所測(cè)得的總凋亡百分比分別是9.8%、18.9%、44.2%、90.3%。
4.特立氟胺可以將肝癌細(xì)胞周期阻滯在S期
特立氟胺具有明顯的細(xì)胞周期阻滯作用,其將細(xì)胞周期阻滯在S期,這種作用也具有明顯的濃度依賴性。特立氟胺作用4
4、8小時(shí)以后,處于S期細(xì)胞所占的比例由4.01%(正常對(duì)照)上升的到33.98%(特立氟胺,50uM),57.65%(特立氟胺,100uM)。
5.Microarray Analysis
正常對(duì)照組與經(jīng)過(guò)特立氟胺作用的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞lncRNA、mRNA表達(dá)譜明顯不同。對(duì)于lncRNA來(lái)講,共有2085種lncRNA出現(xiàn)表達(dá)差異;其中藥物處理的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞相對(duì)于正常對(duì)照組細(xì)胞共有389種上調(diào)的lncRNA和1446種下調(diào)的l
5、ncRNA;對(duì)于mRNA來(lái)說(shuō),經(jīng)過(guò)藥物處理的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞與正常對(duì)照組細(xì)胞共計(jì)有1561mRNA出現(xiàn)表達(dá)差異,其中藥物處理的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞相對(duì)于正常對(duì)照組細(xì)胞有389種上調(diào)的mRNA和1172種下調(diào)的mRNA。GO分析和pathway分析結(jié)果表明一些基因及通路參與特立氟胺的作用機(jī)制中。
結(jié)論:
1.特立氟胺可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖、阻滯細(xì)胞周期在S期,并可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
2.特立氟胺的抗腫瘤作用可能通過(guò)影響lncR
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