禽戊型肝炎病毒中國(guó)分離株致病性及跨種系感染研究.pdf

1、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)感染宿主范圍廣，種類多，變異快。目前已在豬、雞、兔、駱駝、牛、羊等動(dòng)物中獲得了不同動(dòng)物HEV分離株。其中禽HEV在患有雞大肝大脾病(Big liver and spleen disease，BLS)、肝炎脾大(Hepatitis Splenomegaly，HS)綜合征、產(chǎn)蛋率下降雞群以及健康雞群中均有檢出;而且臨床病例調(diào)查發(fā)現(xiàn)禽HEV感染對(duì)蛋雞（母雞）的危害似乎高于公雞、對(duì)散養(yǎng)雞

2、群高于籠養(yǎng)雞群。因此，禽HEV對(duì)不同雞只致病差異仍需要深入研究。此外，已有研究表明豬和兔可能是HEV的自然儲(chǔ)存宿主，豬、兔HEV在彼此的自然宿主之間可以相互跨種感染;且二者均可以感染恒河猴預(yù)示其具有人畜共患的可能性。禽HEV和豬、兔HEV在遺傳性和抗原性有一定的相關(guān)性，已有報(bào)道禽HEV可以跨種系感染火雞，但其是否可以跨種系感染哺乳動(dòng)物仍未見相關(guān)報(bào)道。
　　因此，本研究系統(tǒng)研究了禽HEV中國(guó)分離株（CaHEV）對(duì)蛋雞的致病性，對(duì)公雞

3、、母雞的致病差異以及在散養(yǎng)、籠養(yǎng)模式下的傳播差異;同時(shí)以哺乳動(dòng)物兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，設(shè)計(jì)動(dòng)物試驗(yàn)初步分析了CaHEV跨種感染哺乳動(dòng)物的可能性。本研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.CaHEV對(duì)雞的致病性研究
　　1.1CaHEV感染導(dǎo)致蛋雞產(chǎn)蛋量下降:
　　通過翅靜脈和口鼻兩種途徑分別將相同劑量的CaHEV感染開產(chǎn)蛋雞。結(jié)果顯示，未感染（對(duì)照）蛋雞每周產(chǎn)蛋率大約維持在98.6％;經(jīng)靜脈和口鼻途徑感染的蛋雞在感染后第3周和第8

4、周產(chǎn)蛋量分別下降了30％和25％，感染后第12周和第13周產(chǎn)蛋量恢復(fù)到對(duì)照組水平;經(jīng)口鼻感染的蛋雞在感染后第2、3周分別出現(xiàn)病毒血癥和抗體轉(zhuǎn)陽，均比靜脈接種組晚1周出現(xiàn)，口鼻接種組的肝組織病理損傷比靜脈接種組程度較輕。
　　1.2母雞對(duì)CaHEV的感染性高于公雞:
　　通過靜脈途徑將相同劑量的CaHEV感染公雞和母雞。結(jié)果顯示，在感染后第4周，10只母雞均出現(xiàn)了抗體轉(zhuǎn)陽，而10只公雞中僅有7只出現(xiàn);母雞和公雞均在感染后第1周

5、開始糞便排毒，母雞糞便排毒維持至第5周，而公雞維持至第4周;而且，在感染后第1-4周，母雞出現(xiàn)糞便排毒的雞只數(shù)量分別要比公雞多3、2、3和1只。
　　1.3散養(yǎng)雞群對(duì)CaHEV易感性高于籠養(yǎng)雞群:
　　通過對(duì)中國(guó)傳統(tǒng)的兩種不同飼養(yǎng)模式（籠養(yǎng)和散養(yǎng)）的雞群進(jìn)行抗-禽HEV抗體和RNA檢測(cè)，結(jié)果顯示散養(yǎng)型雞場(chǎng)禽HEV抗體和RNA陽性率分別為54.10％和22.80％，籠養(yǎng)型雞場(chǎng)分別為12.12％和5.66％。設(shè)計(jì)動(dòng)物試驗(yàn)來模擬兩

6、種不同飼養(yǎng)模式以排除養(yǎng)殖場(chǎng)地、飼養(yǎng)管理等因素的干擾，進(jìn)一步驗(yàn)證兩種飼養(yǎng)模式對(duì)禽HEV在雞群中的傳播差異。結(jié)果顯示在散養(yǎng)模式下，6只未接種HEV的雞只通過口鼻途徑感染均出現(xiàn)抗體轉(zhuǎn)陽，病毒血癥和糞便排毒，其中5只出現(xiàn)了肝組織損傷;在籠養(yǎng)模式下，7只未接種HEV的雞只均未出現(xiàn)抗體轉(zhuǎn)陽，2只出現(xiàn)糞便排毒，其中1只同時(shí)伴有病毒血癥和肝組織損傷。
　　2.CaHEV跨種系感染兔研究
　　2.1兔HEV在SPF兔中的檢出:
　　應(yīng)用

7、兩種ELISA方法對(duì)從中國(guó)陜西的某家SPF動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心收集的80兔子血清樣品進(jìn)行HEV抗體檢測(cè)，其陽性率分別為62.5％和72.5％。通過對(duì)收集的52份糞便樣品進(jìn)行HEV RNA檢測(cè)，其陽性率為46.15％。對(duì)獲得的兩株兔HEV進(jìn)行全基因擴(kuò)增，結(jié)果分析顯示二者的同源性高達(dá)90％（命名為CHN-SX-rHEV），與基因3型兔HEV的同源性為78-94％，與基因3型人，豬，野豬和貓鼬HEV的同源性為77-80％。
　　2.2CaHEV

8、跨種系感染兔:
　　以56只兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分為4組，14只/組，分別為CaHEV感染組、CHN-SX-rHEV感染組、豬HEV中國(guó)山東分離株CHN-SD-sHEV感染組和陰性對(duì)照組。通過靜脈注射途徑將相同劑量的CaHEV，CHN-SD-sHEV和CHN-SX-rHEV分別感染兔子，在感染后第2、4、6、8和10周，每組分別剖殺兩只用于病毒RNA和抗體水平等檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（感染后第28周）對(duì)每組剩余4只進(jìn)行剖殺。結(jié)果顯示(1)

9、在CaHEV組中，剖殺于試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（感染后第28周）的4只兔子均出現(xiàn)糞便排毒和病毒血癥，其中1只在感染后第2周丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平升高，第6周出現(xiàn)抗體轉(zhuǎn)陽;序列分析顯示CaHEV-兔分離株有12個(gè)氨基酸發(fā)生突變?；貧w試驗(yàn)顯示CaHEV-兔分離株感染雞只后的致病性與CaHEV分離株相同;(2)在CHN-SD-sHEV組中，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)剖殺的4只兔子均出現(xiàn)糞便排毒和病毒血癥，3只出現(xiàn)抗體轉(zhuǎn)陽，其中2只ALT水平升高;序列分析顯示CH

10、N-SD-sHEV-兔分離株有5個(gè)氨基酸發(fā)生突變。回歸試驗(yàn)顯示CHN-SD-sHEV-兔分離株感染豬后的致病性與CHN-SD-sHEV分離株相同;(3)在CHN-SX-rHEV組中，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)剖殺的4只兔子均出現(xiàn)抗體轉(zhuǎn)陽、糞便排毒和病毒血癥，其中2只ALT水平升高;序列分析顯示CHN-SX-rHEV-兔分離株與本源兔HEV的同源性為100％。
　　綜上所述，本研究分析了禽HEV中國(guó)分離株對(duì)蛋雞的致病性，母雞和公雞對(duì)禽HEV的易感差