IL-21對慢性HBV感染者CD8+T細胞功能影響的體外研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染廣泛流行于世界各國,已成為嚴重威脅人類健康的世界性疾病,也是我國危害性最嚴重、當前流行最為的一種疾病。根據(jù)衛(wèi)生部發(fā)布的數(shù)據(jù),我國當前仍然有慢性乙肝患者3000萬,并且每年大約有30萬人死于重癥肝炎、肝硬化和肝細胞癌等與乙肝病毒感染相關(guān)的肝病。然而至今未闡明HBV感染慢性化的機制。有研究發(fā)現(xiàn),主要由CD4+T細胞分泌的IL-21可以促進CD8+T細胞的增殖分化,在一定程度上增強CD8+T細胞應(yīng)答,在病毒感染慢性化

2、的控制中起到至關(guān)重要的作用。
　　目的:
　　通過體外實驗,觀察IL-21對不同臨床表現(xiàn)HBV感染者特異性T細胞中IFN-γ、PD-1及IL-21的表達水平的的影響及其相互關(guān)系,為闡明IL-21在HBV慢性感染者T細胞功能衰竭中的作用提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1.收集38例HBV感染者(其中CHB患者19例,AHB患者19例)及10例正常對照者的外周血,并完善患者HBsAg定量、HBeAg定量、HBeAb定

3、量、HBV DNA定量、ALT、AST、肝脾 B超等臨床資料。2.密度梯度離心法分離標本外周血中的PBMC,并凍存。3.在IL-2和抗CD28存在情況下分四種條件(陰性刺激、HBV核心蛋白抗原全肽庫刺激、HBV核心蛋白抗原全肽庫和IL-21共同刺激、IL-21刺激)分別培養(yǎng)PBMC。4.用流式細胞儀檢測CD8+T細胞PD-1、IFN-γ及CD4+T細胞IL-21表達水平。5.分析HBV感染者不同刺激條件下的CD8+T細胞PD-1、IFN

4、-γ及IL-21表達水平之間差異和相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.慢性乙型肝炎組特異性CD+3CD8+IFN-γ+T細胞表達量在HBV核心蛋白肽庫刺激(2.93±1.22％)、HBV核心蛋白肽庫刺激和IL-21共同刺激(3.36±1.01%)、陰性未刺激(4.16±1.57%)、IL-21刺激(4.80±1.91%)依次升高,其中IL-21刺激下的表達量高于HBV核心蛋白肽庫刺激、HBV核心蛋白肽庫刺激和IL-21共同刺激的表

5、達量具有統(tǒng)計學意義;
　　2.慢性乙型肝炎組特異性 CD3+CD8+IFN-γ+T細胞表達量在四種刺激條件下均高于急性乙型肝炎組:陰性未刺激時特異性CD3+CD8+IFN-γ+T細胞表達慢性乙型肝炎組(4.16±1.57%)較急性乙型肝炎組(2.13±1.53%)有所升高;HBV核心蛋白肽庫刺激時特異性CD3+CD8+IFN-γ+T細胞表達慢性乙型肝炎組(2.93±1.22%)較急性乙型肝炎組(1.34±0.38%)有所升高;HB

6、V核心蛋白肽庫刺激和IL-21共同刺激時特異性CD3+CD8+IFN-γ+T細胞表達慢性乙型肝炎組(3.36±1.01%)較急性乙型肝炎組(1.86±0.90%)有所升高;IL-21刺激時特異性CD3+CD8+IFN-γ+T細胞表達慢性乙型肝炎組(4.80±1.91%)較急性乙型肝炎組(1.54±0.53%)顯著升高,p均小于0.001,有統(tǒng)計學意義;
　　3.慢性乙型肝炎組特異性CD3+CD8+PD-1+T細胞表達量在四種刺激條

7、件下均高于急性乙型肝炎組:陰性未刺激時特異性 CD3+CD8+PD-1+T細胞表達慢性乙型肝炎組(5.44±3.65%)較急性乙型肝炎組(2.68±1.72%)有所升高,p<0.01;HBV核心蛋白肽庫刺激時特異性 CD3+CD8+PD-1+T細胞表達慢性乙型肝炎組(5.26±3.51%)較急性乙型肝炎組(2.34±1.82%)有所升高,p<0.01;HBV核心蛋白肽庫刺激和IL-21共同刺激時特異性 CD3+CD8+PD-1+T細胞表

8、達慢性乙型肝炎組(5.08±3.36%)較急性乙型肝炎組(2.96±2.23%)有所升高,p<0.05;IL-21刺激時特異性CD3+CD8+PD-1+T細胞表達慢性乙型肝炎組(7.32±5.09%)較急性乙型肝炎組(4.03±2.08%)有所升高,p<0.05,結(jié)果均有統(tǒng)計學意義;
　　4.各因子相關(guān)性分析:在IL-21與PD-1相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)急性乙型肝炎組中除陰性未刺激(r=0.527,p=0.019)、IL-21刺激(r=

9、0.313,p=0.207)外,IL-21與PD-1的表達水平在HBV核心蛋白肽庫刺激(r=0.774,p=0.0001)、HBV核心蛋白肽庫刺激和IL-21共同刺激(r=0.737,p=0.0003)呈現(xiàn)了很好相關(guān)性;在慢性乙型肝炎組中除IL-21刺激(r=0.533,p=0.027)外,IL-21與PD-1的表達水平在陰性未刺激(r=0.753,p=0.0003)、HBV核心蛋白肽庫刺激(r=0.930,p<0.0001)、HBV核

10、心蛋白肽庫刺激和IL-21共同刺激(r=0.82,p<0.0001)呈現(xiàn)了很好相關(guān)性;
　　5.研究發(fā)現(xiàn)HBV DNA、HBsAg定量、HBeAg定量、ALT、AST與慢性乙型肝炎組及急性乙型肝炎組中的IL-21、PD-1和IFN-γ各因子之間均無相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　1.慢性乙型肝炎患者特異性CD8+T細胞IFN-γ和PD-1的表達均高于急性乙型肝炎患者,提示慢性乙型肝炎患者持續(xù)存在HBV特異性CD8+T細胞反應(yīng)