多藥耐藥蛋白MRP4在耐ADM骨肉瘤細胞中的作用機制研究.pdf

1、目的：闡明阿霉素（doxorubicin，ADM）對骨肉瘤細胞系MG63，骨肉瘤耐藥細胞系MG63/DOX,以及原代培養(yǎng)骨肉瘤耐藥細胞系GSF-0686細胞體外增殖抑制作用和多藥耐藥蛋白MRP4在細胞耐藥中的作用。
　　方法：
　　1）CCK-8法檢測ADM對MG63，MG63/DOX，GSF-0686細胞的增殖抑制作用。
　　2）5μmol ADM分別作用于MG63，MG63/DOX，SF-0686三株細胞后，使用液

2、相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定不同時間點三種細胞內(nèi)外的ADM藥物濃度。
　　3）Western Blotting法與qPCR法檢測、比較三種細胞株的MRP4的表達。
　　4）加ADM刺激MG63和MG63/DOX細胞后，采用qPCR法分別檢測兩種細胞隨加藥時間和藥物濃度變化時腫瘤耐藥相關(guān)蛋白MRP4基因的表達。
　　結(jié)果：
　　1）ADM對MG63，MG63/DOX，GSF-0686的增殖均有抑制作用，但其對MG63/D

3、OX和GSF-0686細胞的增殖抑制作用明顯弱于MG63，有顯著性差異（P＜0.05）。
　　2）MG63/DOX和SF-0686細胞內(nèi)ADM濃度明顯低于MG63細胞內(nèi)濃度，同時MG63/DOX和SF-0686細胞外ADM濃度明顯高于MG63細胞外濃度。
　　3）耐藥細胞株MG63/DOX和SF-0686中MRP4的mRNA與蛋白表達量均高于親本株MG63。
　　4）ADM可下調(diào)MG63/DOX和MG63細胞MRP4的