S100A13在人骨肉瘤細(xì)胞生長(zhǎng)侵襲中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討S100A13在人骨肉瘤細(xì)胞生長(zhǎng)侵襲中的作用及機(jī)制。
　　方法:1.隨機(jī)選取骨肉瘤患者18例和正常骨組織18例，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)方法檢測(cè)骨肉瘤組織和正常骨組織中S100A13 mRNA的表達(dá)情況;Western blot檢測(cè)骨肉瘤組織和正常骨組織中S100A13蛋白的表達(dá)情況;分析S100A13表達(dá)量和骨肉瘤患者臨床分期、預(yù)后的關(guān)系。
　　2.Western blot檢測(cè)多種骨肉瘤細(xì)胞系和人正常成

2、骨細(xì)胞系中S100A13蛋白的表達(dá)情況，選取表達(dá)最高細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn);構(gòu)建siRNA慢病毒干擾S100A13基因的表達(dá)，檢測(cè)慢病毒轉(zhuǎn)染效率及干擾效果;生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)及MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)干擾S100A13對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系生長(zhǎng)及增殖的影響;劃痕實(shí)驗(yàn)、基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)干擾S100A13對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響;活體成像系統(tǒng)連續(xù)觀察干擾S100A13對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系裸鼠成瘤情況的影響。
　　3.Western-blot及ELIS

3、A檢測(cè)干擾S100A13后骨肉瘤細(xì)胞系合成分泌FGF-1的情況;Western-blot檢測(cè)干擾S100A13后對(duì)MAPK信號(hào)通路激活的影響。
　　結(jié)果:1.骨肉瘤組織中S100A13 mRNA和蛋白的表達(dá)較正常骨組織中的表達(dá)明顯增高;EnnekingⅡ期患者中S100A13 mRNA的表達(dá)量較EnnekingⅠ期患者明顯增高;低表達(dá)S100A13的骨肉瘤患者比高表達(dá)S100A13的患者具有更長(zhǎng)的無病存活期和總存活期。
　　

4、2.S100A13蛋白在骨肉瘤細(xì)胞系MG-63、U2-OS、HOS、Saos-2中表達(dá)均很強(qiáng)，尤其是在U2-OS細(xì)胞系表達(dá)最強(qiáng);而在人正常成骨細(xì)胞系中S100A13表達(dá)很弱;使用慢病毒感染U2-OS細(xì)胞效率高，2條序列的干擾效果都很好;生長(zhǎng)曲線、實(shí)驗(yàn)MTT實(shí)驗(yàn)均表明干擾S100A13的表達(dá)后，可以抑制U2-OS細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖;劃痕實(shí)驗(yàn)、基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗(yàn)表明，干擾S100A13表達(dá)組較對(duì)照組U2-OS細(xì)胞的遷移侵襲能力明顯減弱;裸鼠成瘤結(jié)果

5、顯示比較對(duì)照組，干擾組腫瘤生長(zhǎng)受到明顯抑制。
　　3.Western-blot及ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示干擾S100A13蛋白后，U2-OS合成分泌的FGF-1減少;干擾S100A13蛋白表達(dá)可以明顯抑制FGF受體的激活，使得磷酸化的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體的表達(dá)大幅降低，F(xiàn)RS2-raf-MEK-ERK通路中FRS2/P-FRS2、P-c-raf、MEK1/2/P-MEK1/2、Erk1/2/P-Erk1/2蛋白的總蛋白量未發(fā)生顯著