人BTC和PDX-1基因的克隆及表達.pdf

1、BTC和PDX-1基因在胰島細胞分化中發(fā)揮著重要作用，在本研究中我們克隆及表達了人BTC和PDX-1基因。 目的：獲得大量具有生物活性的重組人成熟BTC蛋白。構(gòu)建人PDX-1基因的真核表達載體，觀察其在NIH3T3細胞中的表達。 方法：以人胰島細胞瘤cDNA為模板，采用聚合酶鏈式反應(yīng)擴增BTC基因成熟蛋白編碼區(qū)的序列及PDX-1基因蛋白編碼區(qū)的序列，并分別克隆入原核表達載體pET32a(+)及真核表達載體pcDNA3.1

2、中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a(+)-BTC及pcDNA3.1-PDX-1。pET32a(+)-BTC轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，IPTG誘導(dǎo)表達融合蛋白，親和層析法純化獲得融合蛋白，經(jīng)SDS-PAGE、Western blot鑒定，MTT法檢測其促增殖能力。pcDNA3.1-PDX-1用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染NIH3T3細胞，Western blot觀察基因表達情況。 結(jié)果：重組人成熟BTC融合蛋白以水溶性形式分泌于大腸桿菌BL-21胞漿中，其作