人TRP-1基因的克隆及表達(dá).pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文人TRP-1基因的克隆及表達(dá)姓名：李春英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師：高天文2000.5.1第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文人T R P 一1 基因的克隆及表達(dá)一—～～一一一研究生 李春英導(dǎo)師 高天文副教授劉玉峰教授第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院皮膚科西安，7 1 0 0 3 2中文摘要目的：酪氨酸酶相關(guān)蛋白l ( T R P 一1 ) 與白癜風(fēng)的發(fā)病及惡性黑素瘤的免疫及基因治療密切相關(guān)，是近年來較受關(guān)注的黑素細(xì)

2、胞抗原。確定抗原表位對(duì)深入研究抗原及臨床應(yīng)用均具有極其重要的意義，為了給T R P - I 抗原表位確定的研究打下基礎(chǔ)，本研究克隆了T R P一1 4 碼基因并表達(dá)T R P 一1 蛋白。f 材料和方法：通過R T - - P C R 的方法擴(kuò)增T R P —i 編碼基因，克隆至D I j c l 9 載體并測(cè)序，再亞克隆至G S T 融合表達(dá)載體p G E X - 4 T - I ，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，I P T G 誘導(dǎo)表達(dá)T R P —

3、l ／G S T 融合蛋白，分析鑒定表達(dá)蛋白的可溶性，并用谷氨酰胺樹脂柱純化表達(dá)的蛋白。結(jié)果：1 ．采用R T —P C R 方法從培養(yǎng)的人黑素細(xì)胞中擴(kuò)增出編碼T R P —l 的c D N A 序列，序列測(cè)定證實(shí)于文獻(xiàn)報(bào)道的序列一致。2 ．成功構(gòu)建了G S T 融合表達(dá)載體p G E X 一4 T —l ／T R P —l 。3 ．表達(dá)了T R P 一1 ／G S T融合蛋白。4 ．得到純化了的T R P —I ／G S T 融合蛋白