成年大鼠牙槽骨成骨細胞對硝苯地平和卡托普利跨膜轉運的實驗研究.pdf

1、長期服用降壓類藥物，對全身副作用大。選擇合適的劑型和給藥途徑，使藥物達到治療效果的同時，減少藥物的毒副作用，已成為廣大患者的迫切需要。近年來劉洪臣提出了兩種新的給藥途徑設計，即人工種植體全身給藥系統(tǒng)和牙根管全身給藥系統(tǒng)。通過這兩種給藥系統(tǒng)，將治療局部或全身性疾病的藥物經牙周膜或牙槽骨吸收達到全身，達到治療疾病的目的。此設計需要了解牙周各組織，特別是牙槽骨組織對不同藥物的轉運能力。檢索文獻尚未見關于骨組織細胞轉運降壓類藥物的報道，因此本實

2、驗作為人工種植牙全身給藥系統(tǒng)實驗研究的一部分，探討了成骨細胞對硝苯地平和卡托普利的跨膜轉運能力，為人工種植牙全身給藥系統(tǒng)的可行性提供理論依據。本研究共分兩個部分： 第一部分、成年大鼠牙槽骨成骨細胞的體外培養(yǎng)與鑒定 目的：分離培養(yǎng)和鑒定SD成年大鼠牙槽骨來源的成骨細胞。 方法：采用酶消化法和植塊法相結合，分離培養(yǎng)SD大鼠牙槽骨來源的成骨細胞，同時常規(guī)方法誘導培養(yǎng)MC3T3-E1細胞。通過細胞形態(tài)學觀察、堿性磷酸酶染

3、色、Von Kossa染色、茜素紅染色和免疫組化法鑒定成骨細胞。 結果：酶消化法和植塊法相結合，可獲得較高純度和數(shù)量的成骨細胞。成骨細胞堿性磷酸酶染色、Von Kossa染色、茜素紅染、骨鈣素免疫組織化學染色均呈陽性著色。 結論：本試驗采取酶消化法和植塊法相結合，培養(yǎng)的成骨細胞及MC3T3-E1細胞具有正常成骨細胞生物學特性，可為進一步研究提供合適的實驗對象。 第二部分、成年大鼠牙槽骨成骨細胞對硝苯地平和卡托普利

4、轉運 目的：研究成年大鼠牙槽骨成骨細胞對硝苯地平和卡托普利轉運的跨膜轉運，并初步探討藥物濃度和藥物孵育時間對藥物轉運量的影響，為人工種植體給藥系統(tǒng)以及牙根管給藥系統(tǒng)的設計提供實驗依據。 方法：將大鼠牙槽骨成骨細胞及MC3T3-E1細胞與含有藥物(20ug/ml、100ug/ml的硝苯地平或30ug/ml卡托普利)的磷酸鹽緩沖液(PBS)共同孵育1、3、5、10、15、20min后，收集各時間點細胞，用高效液相色譜法測定細

5、胞內藥物含量，考馬斯亮藍法測定細胞蛋白總量。用細胞內藥物含量與細胞蛋白的比值作為觀察藥物轉運量的檢測指標。 結果：1硝苯地平可以被成骨細胞及MC3T3-E1細胞轉運至細胞內。(1)轉運量與細胞種類有關。濃度相同時時，成骨細胞在各時間點的轉運量明顯均大于MC3T3-E1細胞的轉運量(P＜0.01)。(2)轉運量與藥物濃度有關。藥物濃度增高，轉運量越大(P＜0.05)。(3)轉運量與時間有關。2在上述給藥濃度和時間點上，不能測出卡托

6、普利在成骨細胞及MC3T3-E1細胞內的含量。 結論：1大鼠牙槽骨來源成骨細胞及MC3T3-E1細胞可以跨膜轉運硝苯地平。轉運量與藥物濃度、細胞種類、孵育時間有關。從而驗證了人工種植牙全身給藥系統(tǒng)的可行性，至于其轉運機制目前還不十分清楚，有待于進一步深入研究。2本實驗條件下不能檢測出成骨細胞及MC3T3-E1細胞對卡托普利的跨膜轉運，成骨細胞能否跨膜轉運卡托普利還需還需采取其它方法驗證。 綜上所述，本實驗采取酶消化法和植