蜜蜂慢性麻痹病毒在我國部分地區(qū)的發(fā)生與分布及吡蟲啉對其增殖水平的影響.pdf

1、蜜蜂是維持農(nóng)業(yè)平衡的授粉昆蟲之一，具有重要的生態(tài)價值。然而，近年來發(fā)生的蜜蜂大量死亡事件，引起全球重視。一方面，環(huán)境中的化學農(nóng)藥殘留會影響蜜蜂的生理和行為;另一方面，病毒作為主要病原體之一會在蜜蜂免疫力低下時趁機侵入并大量增殖，很可能是導致蜜蜂大量死亡的原因。許多研究證實農(nóng)藥或者病原體均可直接導致蜂群群勢減弱，但是目前關(guān)于威脅蜜蜂健康的不同致病因子之間相互作用的研究還比較少，可能也是導致蜂群大量損失的原因之一。
　　本研究調(diào)查了蜜

2、蜂慢性麻痹病毒(Chronic bee paralysis virus，CBPV)等8種常見病毒在10個省份中的流行情況;通過克隆和測序獲得了CBPV北京株的全基因組序列，并獲得GeneBank號，分別為KX168412和KX168413;通過RT-qPCR檢測蜜蜂不同組織內(nèi)的CBPV負義鏈表達情況;基于吡蟲啉對意大利蜜蜂的毒力曲線初步研究了吡蟲啉對CBPV含量的影響。
　　主要試驗結(jié)果包括1、意蜂檢測到除急性麻痹病毒(Acute

3、 bee paralysis virus，ABPV)外的7種常見病毒;中蜂檢測到除ABPV、CBPV和瓦螨病毒(Varroa destructor virus-1，VDV-1)外的5種常見病毒。在意蜂中病毒檢出省份占比最高的病毒是黑蜂王臺病毒(Black queen cell virus，BQCV)和以色列急性蜜蜂麻痹病毒(Israeli acute bee paralysis virus，IAPV)，分別為100％和90％，其次是CB

4、PV，為60％。在中蜂中病毒檢出省份占比最高的是病毒是中蜂囊狀幼蟲病毒(Chinese sacbroodvirus, CSBV)為80％。其次是IAPV和BQCV，都為70％。在意蜂中感染率最高的是BQCV，為64.64％，在中蜂中感染率最高的是IAPV，為48.89％。CBPV分布較廣能夠在河南、遼寧、北京、甘肅、青海和安徽6個省份意蜂樣品中檢測到，感染率為45.56％;未在中蜂中檢測到CBPV。2、目前NCBI中關(guān)于CBPV中國株基

5、因組序列信息較少，因此本研究通過克隆和測序獲得CBPVRNA1和CBPV RNA2的基因組序列，補充了中國地區(qū)CBPV基因組序列信息。由RNA依賴的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase，RdRp)和預測結(jié)構(gòu)蛋白(predicted structural protein，pSP)序列進化分析可知其與中國和日本的其他序列親緣關(guān)系較近。3、使用熒光定量聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reac

6、tion，PCR)確定CBPV負義鏈的存在，證明CBPV能夠在不同組織有效復制，尤其是頭部和胸部，危害蜜蜂健康。4、通過吡蟲啉檢測試劑盒確定出現(xiàn)大量死亡蜂群的蜜蜂體內(nèi)存在吡蟲啉，含量在17μg/L-33μg/L之間，可能是導致蜜蜂死亡的原因。5、通過飼喂法獲得吡蟲啉對意大利蜜蜂的毒力回歸方程為y=2.566x+2.839，計算得出LC25=0.816 mg/L，LC5=1.350 mg/L，LC10=2.027 mg/L。首先飼喂健康蜜

7、蜂CBPV粗毒，之后再飼喂蜜蜂吡蟲啉，定量蜜蜂體內(nèi)CBPV含量。飼喂CBPV+LC5的吡蟲啉組在48h時CBPV含量即顯著高于對照組，72h時三個飼喂農(nóng)藥組蜜蜂CBPV含量都顯著高于對照組，96h時LC10組顯著高于其它組。結(jié)論:不同濃度吡蟲啉會增加CBPV增殖水平，但是CBPV含量并不隨時間和吡蟲啉濃度不同有明顯的變化趨勢。從試驗數(shù)據(jù)可以看出這兩者之間相互作用的復雜性，但本研究僅是初步探索這兩個因素之間的關(guān)系，未來還需要更深入研究探索