生物鐘基因PER1對口腔鱗癌細胞中生物鐘基因網(wǎng)絡的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　探討口腔鱗癌細胞內(nèi)生物鐘基因PER1對生物鐘基因網(wǎng)絡中其它生物鐘基因表達的影響。
　　方法：
　　通過RNA干擾技術(shù)沉默PER1并構(gòu)建3組PER1短發(fā)夾(short hairpin)RNA慢病毒載體質(zhì)粒，然后分別感染SCC15口腔鱗癌細胞株，經(jīng)Western blot和實時熒光定量PCR（Quantitative real-time PCR，qRT-PCR）篩選并確定PER1沉默效果最佳組定為實驗組，以轉(zhuǎn)染

2、scramble質(zhì)粒（不含任何干擾基因片段）的SCC15細胞為陰性對照組，以相同培養(yǎng)條件下不曾做處理的SCC15細胞為空白對照組。
　　分別在體外和體內(nèi)應用qRT-PCR檢測PER1沉默前后生物鐘基因CLOCK、BMAL1、PER2、PER3、DEC1、DEC2、CRY1、CRY2、TIM、CKIε、RORα、NPAS2和REV-ERBα mRNA的表達情況，應用流式細胞儀檢測口腔鱗癌細胞的增殖和凋亡水平的改變情況，并應用裸鼠體內(nèi)

3、成瘤實驗觀察SCC15癌細胞體內(nèi)成瘤能力改變情況。
　　結(jié)果：
　　PER1基因沉默后，體內(nèi)和體外癌細胞中生物鐘基因PER2、DEC1、DEC2、CRY1、CRY2和NPAS2 mRNA的表達顯著降低（P＜0.05），PER3、TIM、RORɑ和REV-ERBɑmRNA的表達顯著升高（P＜0.05），而CLOCK、BMAL1和CKIεmRNA的表達無顯著改變（P＞0.05）。PER1沉默之后，SCC15癌細胞的凋亡降低，增殖