遼寧漢族群體HLA-A、B、C和DRB1等位基因分型及與神經(jīng)纖維瘤?、裥拖嚓P(guān)性研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文遼寧漢族群體HLAA、B、C和DRB1等位基因分型及與神經(jīng)纖維瘤?、裥拖嚓P(guān)性研究姓名：韓世新申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師：宋芳吉20040401識(shí)的滲透，已經(jīng)從傳統(tǒng)血清學(xué)發(fā)展到現(xiàn)代分子生物學(xué)，從細(xì)胞水平的檢測(cè)提高到基因水平。PCR技術(shù)的產(chǎn)生，為分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用于壬IlA研究領(lǐng)域提供了有效的方法和捷徑。1991年第11屆國(guó)際組織相容性專題研討會(huì)之后，HLA血清學(xué)研究大體告一段落，全面轉(zhuǎn)入DNA分

2、型階段。序列特異性寡核苷酸探針(Sequencespecificoligonucleotideprobes，SSOP)方法于1986年由Saiki等人首先報(bào)道，用于檢測(cè)HLA—II類基因，具有靈敏度高，特異性好，結(jié)果精確、可靠，樣品需量小的優(yōu)點(diǎn)。由于I類抗原的等位基因遠(yuǎn)比II類復(fù)雜，所需要的序列特異性寡核苷酸探針數(shù)量龐大，而且各等位基因之間存在序列共享現(xiàn)象，因此l臨床應(yīng)用，尤其是大樣本量檢測(cè)，尚有一定的困難。由于HLA個(gè)體遺傳學(xué)差異的本

3、質(zhì)是在編碼其抗原產(chǎn)物的基因水平上，所以分析HLA基因型無(wú)疑是對(duì)HLA型別分析的最準(zhǔn)確的方法。其準(zhǔn)確性遠(yuǎn)高于血清學(xué)和細(xì)胞學(xué)分型，并已逐漸取代了前兩者的位置。測(cè)序分型技術(shù)用于HL～一DRBl、HLA—DQBI和DQAl分型，首先由Santamaria等于1992年報(bào)道，是最可靠的基因分型方法。目前只有通過(guò)測(cè)序方法才可準(zhǔn)確證實(shí)新發(fā)現(xiàn)的HLA新等位基因。常用的測(cè)序分析方法包括DNA序列測(cè)定(DNAsequencing)和PCR擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序法

4、(Polymerasechainreaction—sequencebasedtyping，PCR—SBT)。神經(jīng)纖維瘤病I型(Neurofibromatosistype1，NFl)是源于神經(jīng)嵴細(xì)胞發(fā)育分化異常所致的常染色體顯性遺傳病，患病率約為1／3000～3500。臨床表現(xiàn)以神經(jīng)纖維瘤，牛奶咖啡斑等為特征，也可因顱內(nèi)腫瘤的出現(xiàn)伴有不同的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，以及出現(xiàn)與腫瘤無(wú)關(guān)的智力障礙，精神發(fā)育遲緩等癥狀。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)NFIHLA多態(tài)住的研究

5、只見個(gè)案報(bào)道，國(guó)外對(duì)該病的研究則集中在基因突變類型等方面，對(duì)HLA多態(tài)性研究較少，有必要對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)研究，總結(jié)其免疫遺傳學(xué)方面的規(guī)律，從而有助于探索其不同表型的發(fā)生機(jī)制。為此，我們做了如下工作：一、采用SSOP方法對(duì)遼寧漢族群體進(jìn)行硼A—I類基因A、B、c位點(diǎn)進(jìn)行高分辨率等位基因分型。二、采用PCRSBT方法對(duì)遼寧漢族群體進(jìn)行HLAII類基因DRBl位點(diǎn)進(jìn)行等位基因測(cè)序分型。三、采用SSOP和PCRSBT方法分別對(duì)NFl患者進(jìn)行HLAI