豬圓環(huán)病毒2型(WH株)和豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒混合感染致病性的研究.pdf

1、通過流行病學(xué)調(diào)查，PCV2分布極為廣泛，豬群抗體陽性率較高，PRRSV是嚴(yán)重危害豬群的健康健康、給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大損失的重要傳染病，并且這兩種病毒的混合感染率在PCV2陽性豬中占很大比例，并且常常伴隨著細(xì)菌或其他病原體的繼發(fā)感染，造成豬群嚴(yán)重的臨床癥狀甚至很高的死亡率。而當(dāng)前人們尚未清楚地認(rèn)識到這兩種病毒的協(xié)同致病機(jī)制，給PCV2和PRRSV的混合感染的防制帶來困難。因此本實驗以豬肺泡巨噬細(xì)胞(Porcine alveolar mac

2、rophages， PAMs)為模型觀察PCV2和PRRSV共感染在體外對PAM的影響；通過人工感染仔豬，進(jìn)行PCV2和PRRSV單獨(dú)感染及混合感染對仔豬致病性的研究，以期為兩病毒混合感染的診斷和防制提供依據(jù)。一、PCV2和PRRSV混合感染PAMs的影響
　　 體外分離培養(yǎng)PAMs后，分別單獨(dú)感染PCV2、PRRSV和按照不同順序混合感染PCV2和PRRSV，于接種后6h、24h、48h、60h取樣，用real-timePCR

3、和間接免疫熒光(indirectimmunofluorescence，IFA)檢測PCV2的滴度，同時觀察細(xì)胞病變和細(xì)胞凋亡率，檢測細(xì)胞因子如TNF-α、IL-8和IFN-γ的表達(dá)水平。結(jié)果如下：
　　 1、PAM在體外培養(yǎng)不分化增殖，real-timePCR和IFA結(jié)果都顯示了PCV2在PAMs中沒有增殖現(xiàn)象，PCV2和PRRSV混合感染雖不促進(jìn)PCV2的增殖，但是造成了PCV2在胞漿的分布不均勻，成點狀或放射狀分布。

4、　　 2、相對于病毒單獨(dú)感染組，PCV2和PRRSV混合感染組造成了很高的細(xì)胞死亡率(50％)和較高的細(xì)胞凋亡率(15％)。
　　 3、相對于病毒單獨(dú)感染組，PCV2和PRRSV混合感染組TNF-α、IL-8的表達(dá)量明顯增加，但是IFN-γ的表達(dá)水平也明顯受到抑制，表現(xiàn)出一定程度的免疫抑制。
　　 二、、PCV2和高致病性PRRSV人工感染仔豬臨床學(xué)指標(biāo)的測定與分析研究
　　 通過人工感染28日齡斷奶仔豬，建立

5、PCV2和PRRSV單獨(dú)感染以及PCV2/PRRSV混合感染病理的模型。對感染豬的臨床癥狀、排毒量、病毒在組織中的分布規(guī)律和病理變化進(jìn)行檢測。
　　 1.初步研究表明PCV2/PRRSV混合感染能復(fù)制出典型的PMWS臨床癥狀，造成豬只發(fā)熱、精神沉郁、進(jìn)行性消瘦，明顯嚴(yán)重于任一病毒單獨(dú)感染組。
　　 2.通過對不同病毒感染組的病毒血癥、排毒規(guī)律進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，PCV2感染組的病毒血癥持續(xù)整個試驗過程，而PCV2/PRR

6、SV混合感染組血清中病毒載量高于PCV2單獨(dú)感染組。
　　 3.剖檢結(jié)果顯示PCV2和PRRSV混合感染能引起與PMWS一致的嚴(yán)重的組織病變，包括間質(zhì)性肺炎和淋巴組織出血腫大，與臨床的PMWS病變基本相一致，并且混合感染比任一單獨(dú)病毒感染癥狀都嚴(yán)重。定量PCR檢測PCV2在各個組織的分布，結(jié)果顯示PCV2主要分布在像脾臟、扁桃體、淋巴結(jié)等一些免疫器官和組織，并且PCV2/PRRSV混合感染促進(jìn)了PCV2在組織中的增殖，加重了組織