重組豬α干擾素抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的應(yīng)用研究.pdf

1、利用本實(shí)驗(yàn)室成功構(gòu)建的豬α干擾素原核達(dá)載體PETIFN-α，在大腸桿菌BL21中表達(dá)了豬α干擾素，表達(dá)產(chǎn)物為一融合蛋白。SDS-PAGE電泳后在約40.2kDa處出現(xiàn)一條帶，同預(yù)期結(jié)果一致。經(jīng)過(guò)優(yōu)化IPTG的濃度和誘導(dǎo)時(shí)間，豬α干擾素的表達(dá)量明顯提高，表達(dá)量約占細(xì)菌總蛋白量的20％。應(yīng)用鎳瓊脂糖凝膠樹(shù)脂層析柱吸附純化豬α干擾素融合蛋白，不同濃度咪唑緩沖液洗脫吸附蛋白，SDS-PAGE電泳鑒定表明，400mM咪唑的緩沖液洗脫的豬α干擾素蛋

2、白，純度最高，達(dá)到蛋白純化的預(yù)期目的，可以用于抗病毒活性試驗(yàn)。 用細(xì)胞病變抑制法在Marc-145細(xì)胞上測(cè)定重組豬α干擾素活性，測(cè)定重組豬α干擾素抗PRRSV的病毒活性為5.0×103U/mg。將干擾素做不同濃度梯度稀釋后，在單層Marc-145細(xì)胞上做豬α干擾素抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒試驗(yàn)，測(cè)得干擾素對(duì)Marc-145細(xì)胞的無(wú)毒濃度為0.20mg/ml，最小抑制濃度為0.14mg/ml。結(jié)果表明，重組豬α干擾素在體外對(duì)PRR