腎小管酸中毒患者血清抗腎小管抗體的檢測.pdf

1、腎小管酸中毒(renal tubular acidosis,RTA)是由于近端及(或)遠端腎小管功能障礙所致的代謝性酸中毒，而腎小球功能正?；驌p害輕微。本征主要特征有高氯性代謝性酸中毒、電解質失衡，臨床上表現為煩渴、多飲、多尿、腎性佝僂病或骨軟化癥、腎鈣化癥等。目前大都將RTA分為4型：即Ⅰ型(遠端腎小管酸中毒，distal renal tubular acidosis，dRTA)、Ⅱ型(近端腎小管性酸中毒，proximal renal

2、 tubular acidosis,pRTA)、Ⅲ型(混合型腎小管性酸中毒)、Ⅳ型(高血鉀型腎小管性酸中毒)。既往腎小管酸中毒曾被認為是一種常染色體顯性或者隱性遺傳性疾病。但是近年來越來越多的研究發(fā)現腎小管酸中毒常伴發(fā)著某些自身免疫性疾病，提示RTA的發(fā)病可能與自身免疫因素有某些內在聯系。其中以Ⅰ型RTA常見。 Ⅰ型RTA在成人往往表現為散在發(fā)病，在兒童多為家族發(fā)病。散在發(fā)病可以是原發(fā)的(幾乎都發(fā)生在女性)也可以是繼發(fā)性，如繼發(fā)

3、于自身免疫性疾病，尤其是干燥綜合征。干燥綜合征的腎損害較常見，不同的研究結果報告有所差異，但是多數認為其發(fā)生率為40﹪-50﹪，而腎損害主要累及遠端腎小管出現腎小管酸中毒。 免疫熒光技術(immunofluorescence assay,IFA)是根據抗原抗體反應具有高度特異性，以異硫氰酸熒光素(FITC)、羅丹明(RB200)等熒光色素標記物與已知的抗原或抗體結合，然后測定未知抗原或抗體的技術。熒光素與抗體的結合物稱為熒光抗體

4、，熒光抗體與相應抗原的結合在熒光顯微鏡下顯示不同程度的熒光，由此可對抗原進行定性、定量或定位的檢測。本實驗即是采用間接免疫熒光技術，以FITC標記的抗人IgG定性檢測腎小管酸中毒病人血清抗腎小管抗體的存在，從免疫學角度初步探討其發(fā)病的自身免疫性。 研究方法： 1．研究對象：確診為腎小管酸中毒患者血清11份，診斷依據為①臨床上有代謝性酸中毒，而尿PH值在6.0以上；②低血鈉、低血鉀及低鈣血癥，血氯明顯增高；③骨痛及骨軟化癥

5、。④輔助檢查發(fā)現骨質疏松，病理性骨折或尿路結石等。健康對照者空腹血血清10份，采血前3月內均無感冒、服藥史，性別、年齡與RTA患者匹配。干燥綜合癥患者血清10份，干燥綜合癥患者確診依據為①干燥性角膜炎；②口干燥癥：③血清中有下列一種抗體陽性：抗SS-A抗體、抗SS-B抗體、抗核抗體(．ANA)>1：20、類風濕因子(RF)>1：20，具備以上3條并除外其它結締組織病、結節(jié)病、移植物抗宿主病、淋巴瘤等疾病者可以確診?？瞻讓φ帐褂肞BS緩沖

6、液代替血清反應。 2．研究方法：①抗腎小管基底膜抗體的檢測：采用歐蒙公司提供的猴腎間接免疫熒光法檢測試劑盒。第一次溫育時，已稀釋的血清與固定在載片反應區(qū)中生物薄片上的猴腎冰凍切片反應。如果標本陽性，特異性IgG、IgA、IgM抗體與相應抗原結合。在第二次溫育時，結合的抗體與熒光素標記的抗人抗體反應，然后在熒光顯微鏡下觀察特異的熒光模型。②抗腎小管細胞胞漿抗體的檢測：采用人體腎組織石臘切片，利用傳統(tǒng)的濕盒，使用10﹪山羊血清封閉非

7、特異性結合位點，起始采用血清原液。均使用共聚焦顯微鏡觀察并采集圖像。③腎小管酸中毒患者血清均測空腹血生化、血清蛋白電泳、血沉、ANA、ENA系列、尿常規(guī)、24小時尿蛋白定量。部分檢測甲狀腺功能，行腎臟B超、骨密度檢查。 3．統(tǒng)計分析：所有數據均以均數±標準差(X±S)表示。各組數據組間均數比較采用兩樣本t檢驗或t’檢驗(方差齊采用兩樣本t檢驗，方差不齊采用t’檢驗)。檢驗水平α=0.05。 結果： 腎小管酸中毒患

8、者血清抗腎小管抗體陽性率為6/11，明顯高于干燥綜合癥患者組(1/10)和健康對照患者組。 結論： 腎小管酸中毒患者體內存在抗腎小管抗體，主要為抗腎小管細胞胞漿抗體，提示腎小管酸中毒發(fā)病與自身免疫因素有關。 意義： 關于腎小管酸中毒免疫學發(fā)病機制有不少的研究報道，但是尚無充分的實驗室證據。該病在治療上也是一直沿用傳統(tǒng)的糾正酸中毒及電解質紊亂、補鉀補鈣等對癥治療。本實驗說明腎小管酸中毒患者體內存在自身抗體，