疫苗中牛血清殘存量檢測(cè)試劑的研究—抗牛血清IgG單克隆抗體的研制.pdf

1、本文記述了為檢測(cè)疫苗殘存牛血清而建立抗牛血清IgG單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其分泌的抗體理化性質(zhì)和生物學(xué)特性的鑒定過程。用牛血清IgG免疫BALB/c小鼠，取其脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0在PEG作用下進(jìn)行融合，培養(yǎng)上清用間接ELISA法篩選出能穩(wěn)定分泌抗牛血清IgG單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，共獲得4株，分別命名為1G5、2A8、3F5、4C5。通過瓊脂雙擴(kuò)散鑒定證明：2A8為小鼠IgG2a，其余3株為IgG1；腹水ELISA效價(jià)分別達(dá)到

2、1:2560000、1:1280000、1:640000、1:2560000；通過間接ELISA試驗(yàn)，除3F5株單抗與山羊血清有交叉反應(yīng)外，1G5、2A8、4C5株與人和馬、豬、羊、兔、豚鼠等血清均不發(fā)生交叉反應(yīng)；同時(shí)證實(shí)4株單抗與制備病毒性疫苗的基質(zhì)液呈陰性反應(yīng)；相加指數(shù)測(cè)定證實(shí)4株單抗識(shí)別兩種不同的抗原表位；WesternBlotting試驗(yàn)顯示4株單抗均識(shí)別分子量為160KD的牛血清IgG；通過硫氰酸銨洗脫法比較4株單抗相對(duì)親和力

3、大小，依次為：4C5>2A8>1G5>3F5；4株單抗相對(duì)敏感度測(cè)定采用間接ELISA法，在抗體濃度均為5ug/ml時(shí)，能檢出的牛IgG的量，在6.25ng/ml-50ng/ml之間，其中2A8、3F5、4C5單抗能檢出牛IgG的量均<25ng/ml，比較相對(duì)敏感度高低，依次為2A8>4C5>3F5>1G5；4株雜交瘤細(xì)胞株的染色體計(jì)數(shù)為96、93、92、90；4株雜交瘤細(xì)胞株分別連續(xù)培養(yǎng)三個(gè)月以及凍存半年后復(fù)蘇，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，4株雜交