NR1-TFR融合表位疫苗在腦缺血再灌注損傷大鼠模型中的作用研究.pdf

1、 目的：腦缺血再灌注時(shí),腦組織NMDAR的升高和激活可能是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。我們前期研究的NR1-TfR重組疫苗可產(chǎn)生anti-NR1,透過血腦屏障。本研究通過制作大鼠腦缺血再灌注模型,觀察致傷后神經(jīng)行為學(xué)、神經(jīng)元密度、局部谷氨酸等的變化,評價(jià)此疫苗在大鼠腦缺血再灌注模型中的作用。
方法：(1) 將前期制作的NR1-TfR重組疫苗解凍復(fù)蘇,通過基因測序,將測序正確的細(xì)菌通過平板菌落計(jì)數(shù)法,制成1 X 109cfu/ml單位的

2、口服疫苗；(2)將72只SD大鼠隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(sham 經(jīng)灌胃口服鹽水 2ml),鹽水組(saline 經(jīng)灌胃口服鹽水 2ml),疫苗組(vaccine 經(jīng)灌胃口服疫苗2ml)。兩周內(nèi)灌胃四次,在末次灌胃后第四天開始造模。sham 組僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈和股動(dòng)脈監(jiān)測動(dòng)脈壓,不造模；saline 和vaccine組模型采用二血管阻斷+低血壓法建立腦缺血再灌注大鼠模型。再灌注后1h、24h觀察其行為學(xué)評分,再灌注后24、48、72h

3、,HE染色觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元密度,液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用方法檢測腦脊液中的谷氨酸含量。
結(jié)果：1 實(shí)驗(yàn)過程中,動(dòng)物死亡情況 由于灌胃導(dǎo)致大鼠死亡 4只,造模過程中由于呼吸心跳驟停導(dǎo)致死亡三只。
2 神經(jīng)行為學(xué)評分 缺血前大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分均正常(p>0.05),再灌注后 1h,sham 組的評分高于 saline 組和 vaccine3 神經(jīng)元密度 再灌注 24h,saline組和 vaccine 組的

4、神經(jīng)元密度均低于sham組(P<0.01),saline組低于vaccine組(P<0.01)；再灌注48h,saline組和vaccine組的神經(jīng)元密集均低于sham組(P<0.01),saline組低于vaccine組(P<0.05)；再灌注72h,saline組的神經(jīng)元密度低于sham組和vaccine組(P<0.01)。
4 谷氨酸的測定 再灌注24h,sham組的GLU濃度低于saline組和 vaccines

5、組(P<0.01),saline 組的 GLU 濃度低于 vaccine 組(P<0.01)；再灌注 48h,sham 組的 GLU 濃度低于 saline 組和vaccine組(P<0.01)；再灌注72h,saline組的GLU濃度高于sham和vaccine組(P<0.01)。
結(jié)論：1 本研究中,大鼠腦缺血再灌注后,GLU濃度呈現(xiàn)先升高后降低,然后再升高的趨勢：24h 時(shí)升高,48h 時(shí)降低,72h 時(shí)再升高。