感染性休克時Alpha-腎上腺素受體基因表達改變的機制及抗氧化劑的治療作用.pdf

1、全文分為三章： 第一章抗氧化劑有效抑制細菌內(nèi)毒素性休克大鼠α1-腎上腺素受體基因表達下調(diào) 目的：觀察細菌內(nèi)毒素性休克時大鼠α1-腎上腺素受體(α1-ARs)mRNA的表達狀況及抗氧化劑的治療作用。 方法：雄性SD大鼠40只，隨機分成五組：①空白對照組(n=8)；②內(nèi)毒素休克組(LPS,15mg·kg-1靜脈注射，n=8)；③丙泊酚組(LPS注入1h后，丙泊酚10mg·kg-1靜脈注射，繼以10mg·kg-1靜脈持

2、續(xù)泵入，n=8)；④尿酸組(UA，LPS注入1h后，腹腔注射UA200mg·kg-1，n=8)；⑤N-乙酰5-甲氧基色胺組(MLT，LPS注入1h后，腹腔注射MLT10mg·kg-1，n=8)。各組大鼠于注射LPS6h后處死，迅速留取胸主動脈、下腔靜脈、心臟、肝臟、肺臟、腎臟組織。提取各組織的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測各組織內(nèi)α1A-AR、α1B-AR和α1D-ARmRNA的表達。 結(jié)果：與對照組比較，L

3、PS組大鼠動脈、肝臟、肺臟、腎臟組織中的α1-ARs三種亞型的表達量均顯著下降(p＜0.01)，靜脈、心臟組織中α1A-AR、α1B-ARmRNA的表達量也顯著下降(p＜0.01)。與LPS組相比，除MLT組無效外，丙泊酚組肺臟和腎臟組織中α1A-ARmRNA的表達明顯逆轉(zhuǎn)(p＜0.05)，動脈、肝臟、肺臟、腎臟組織中α1B-AR、α1D-AR的mRNA表達明顯逆轉(zhuǎn)(p＜0.05)，靜脈和心臟組織中α1B-ARmRNA的表達也顯著逆轉(zhuǎn)(

4、p＜0.05)。與LPS組相比，尿酸組在腎組織中α1A-ARmRNA的表達有所逆轉(zhuǎn)(p＜0.05)，在肺以外的各組織中α1B-ARmRNA表達都有明顯逆轉(zhuǎn)(p＜0.05)，動脈、肝臟、肺臟、腎臟組織中α1D-ARmRNA表達明顯逆轉(zhuǎn)(p＜0.05)。 結(jié)論：細菌內(nèi)毒素性休克時機體各主要臟器α1-腎上腺素受體基因表達普遍下調(diào)。抗氧化劑不同程度逆轉(zhuǎn)細菌內(nèi)毒素性休克時α1-腎上腺素受體基因表達可能是其改善循環(huán)機能障礙的機制之一。

5、 第二章一氧化氮及衍生物導致血管平滑肌細胞α1-腎上腺素受體基因表達下調(diào) 目的：觀察炎癥反應(yīng)時血管平滑肌α1-腎上腺素受體基因轉(zhuǎn)錄水平的改變及可能機理。 方法：原代培養(yǎng)大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞(VSMC)，并作如下分組：(1)對照組(含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液)；(2)酪氨酸組(Tyr，250μmol/L)；(3)3-硝基酪氨酸組(3-NT,250μmol/L)；(4)硝普鈉組(SNP,500μmol/L)；(5

6、)炎性細胞因子組(cytokines，TNF-α100ng/ml+IL-1β50ng/ml)；(6)Nω-nitro-L-argininemethylester+炎性細胞因子組(L-NAME，L-NAME5mmol/L+TNF-α100ng/ml+IL-1β50ng/ml)；(7)N-乙酰-5-甲氧基色胺+炎性細胞因子組(MLT，MLT1mmol/L+TNF-α100ng/ml+IL-1β50ng/ml)，每組重復六次。上述各組細胞干預

7、12h后，提取各組細胞的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法測定α1A-AR、α1B-AR、α1D-ARmRNA的表達。 結(jié)果：與對照組相比，SNP組和Cytokines組血管平滑肌細胞細胞α1A-AR、α1D-ARmRNA的表達顯著下降(P＜0.05)。L-NAME組、MLT組上述各受體亞型mRNA的表達比Cytokines組顯著升高(P＜0.01)。與對照組相比，SNP組、3-NT組α1B-AR、α1D-ARmRN

8、A表達明顯降低(P＜0.05)。Tyr組α1-ARs三個亞型mRNA的表達與對照組比較無顯著差異(P＞0.05)。 結(jié)論：一氧化氮(NO)及NO衍生物3-NT均顯著抑制了血管平滑肌細胞細胞α1-腎上腺素受體mRNA的表達，可能為感染性休克時血管低反應(yīng)性的病理機制之一。抑制NO的產(chǎn)生和抗氧化劑治療可減輕這種病理反應(yīng)。 第三章抗氧化劑抑制細菌內(nèi)毒素性休克大鼠誘導型一氧化氮合酶的基因表達 目的：觀察抗氧化劑對細菌內(nèi)毒素

9、性休克時大鼠各組織器官誘導型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表達的影響，探討抗氧化劑逆轉(zhuǎn)感染性休克循環(huán)機能障礙的機理。 方法：雄性SD大鼠40只，體重200-250g，隨機分成五組：①空白對照組(n=8)；②細菌內(nèi)毒素性休克組(LPS，15mgkg1靜脈注射，n=8)；③丙泊酚組(LPS注入1h后，丙泊酚10mgkg1靜脈注射，繼以10mgkg1h1靜脈持續(xù)泵入，n=8)；④尿酸組(UA，LPS注入1h后，腹腔注射UA200mg

10、kg1，n=8)；⑤N-乙酰5-甲氧基色胺組(MLT，LPS注入1h后，腹腔注射MLT10mgkg1，n=8)。各組大鼠于注射LPS6h后處死，迅速留取胸主動脈、下腔靜脈、心臟、肝臟、肺臟、腎臟組織。提取各組織的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測各組織內(nèi)iNOSmRNA的表達。注射LPS6h后檢測各組動物血漿丙二醛(MDA)及硝酸鹽/亞硝酸鹽(nitrate/nitrite)的濃度。 結(jié)果：與對照組比較，LPS組

11、各組織器官的iNOSmRNA表達均大幅度上升(p＜0.01)。與LPS組相比較，丙泊酚組動脈iNOSmRNA表達下降26％(P＜0.05)，其他組織器官iNOSmRNA表達下降更為顯著(P＜0.01)，其中靜脈組織表達下調(diào)最為顯著達44.7％。UA組各組織器官iNOSmRNA表達均顯著下調(diào)(P＜0.01)，其中靜脈iNOSmRNA的表達較之LPS組下調(diào)56.6％。MLT組各組織器官iNOSmRNA表達與LPS組相比也顯著降低(P＜0.0