線粒體DNA缺失對模擬日光照射誘導細胞凋亡的影響探-.pdf

1、背景:人類的各種社會活動,主要是鹵代烴類的排放,導致平流層臭氧空洞形成,這使得日光到達地面的有害射線增多。日光照射是一個已明確的導致人類皮膚光老化和皮膚癌發(fā)生的自然因子。長期的日照對皮膚的損害主要表現為皮膚光老化和暴露部位皮膚腫瘤的多發(fā)。光損傷誘導多種類型的線粒體DNA缺失在光老化皮膚及暴露部位皮膚腫瘤中大量累積已被廣泛證實,但其生物學意義仍有待進一步闡明。細胞凋亡在皮膚光老化和日光相關皮膚腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有重要意義,一方面,日光誘

2、導的細胞凋亡可使皮膚組織中的細胞成份減少,從而出現退行性的老化改變;另一方面,出現了基因突變的細胞如果不能及時凋亡則可能導致腫瘤的發(fā)生。日光照射是否能通過對線粒體DNA的作用影響細胞的凋亡目前還不是很清楚。本研究以線粒體DNA缺失細胞(Rho°206細胞)及其母本細胞(143B細胞)為模型,利用模擬日光照射誘導細胞凋亡,進而探討線粒體DNA對凋亡的影響,為闡明線粒體DNA缺失在慢性皮膚光損傷中的作用提供依據。
　　目的:通過研究模

3、擬日光照射誘導Rho°206細胞和143B細胞凋亡,探討線粒體DNA缺失對模擬日光照射誘導細胞凋亡的影響及其可能機制。
　　方法:1、TEM觀察細胞凋亡的形態(tài)學變化。2、普通光學顯微鏡觀察不同模擬日光照射劑量(177mJ/cm2+3.39J/cm2、354mJ/cm2+6.78J/cm2、531mJ/cm2+10.17J/cm2和708mJ/cm2+13.56J/cm2)誘導Rho°206細胞和143B細胞凋亡的形態(tài)學變化。3、H

4、oechst33258染色熒光顯微鏡觀察不同模擬日光照射劑量誘導Rho°206細胞和143B細胞凋亡的形態(tài)學變化。4、采用流式細胞儀檢測不同模擬日光照射劑量誘導Rho°206細胞和143B細胞的凋亡情況。5、采用流式細胞儀檢測不同模擬日光照射劑量誘導Rho°206細胞和143B細胞的活性氧簇水平。
　　結果:1、形態(tài)學結果顯示,在照射組中,兩細胞都出現了典型的凋亡形態(tài)學改變。和143B細胞相比,線粒體DNA缺失細胞相應照射劑量組誘

5、導的凋亡效應較輕。而在假照射組中,兩細胞的凋亡形態(tài)未見明顯差異。2、AnnexinV/7-AAD檢測結果顯示,在假照射組,143B細胞的凋亡率(9.23±0.85％)和Rho°206細胞(9.10±1.20%)相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。而在照射組中,143B細胞相應照射劑量組凋亡率分別為30.51±1.61%、39.76±1.15%、46.56±1.30%和55.86±1.81%,Rho°206細胞凋亡率分別為22.93±

6、1.15%、27.26±0.91%、36.10±1.20%和39.53±1.15%,同一細胞不同劑量組間比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);兩細胞同樣照射劑量組間比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3、流式細胞儀檢測細胞內ROS水平結果顯示,在假照射組,143B細胞的ROS水平(8.25±0.86%)和Rho°206細胞(8.15±0.92%)相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。而在照射組中,143B細胞相應照射劑量組ROS

7、水平分別為21.41±1.04%、24.82±1.12%、28.85±1.07%和32.78±1.14%,Rho°206細胞ROS水平分別為14.99±1.17%、18.36±1.05%、24.44±1.14%和27.61±1.11%,同一細胞不同劑量組間比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);兩細胞同樣照射劑量組間比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論:1、模擬日光照射可誘導線粒體DNA缺失細胞及其母本細胞凋亡,且其