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文檔簡介
1、力達(dá)霉素(原名C-1027)屬于烯二炔類(enediyne)抗生素,以其強(qiáng)烈殺死腫瘤細(xì)胞的活性極其獨(dú)特的切割DNA方式,而頗受重視.力達(dá)霉素由一個(gè)輔基蛋白和一個(gè)發(fā)色團(tuán)組成,發(fā)色團(tuán)是力達(dá)霉素的活性部分.力達(dá)霉素能引起DNA斷裂,并有核苷酸堿基和序列的特異性.國內(nèi)外大量的研究表明:力達(dá)霉素不僅在體內(nèi)外強(qiáng)烈的抑制腫瘤生長,還具有抗病毒作用.力達(dá)霉素是具有誘人的臨床應(yīng)用前景,值得深入研究的抗生素.本研究通過研究力達(dá)霉素作用人肝癌BEL-7402
2、細(xì)胞,人乳腺癌MCF-7細(xì)胞,試圖闡明其高效性的引起腫瘤細(xì)胞死亡的分子機(jī)制.我們先前的研究表明,力達(dá)霉素能誘導(dǎo)多種類型的細(xì)胞死亡,如典型細(xì)胞凋亡,細(xì)胞裂亡&細(xì)胞衰老和非caspase介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,但確切的通路還不清楚.本研究中,我們重點(diǎn)研究力達(dá)霉素引起線粒體通路的變化.0.1 μ M力達(dá)霉素處理BEL-7402細(xì)胞2 h或6h后,與對照細(xì)胞相比,細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞色素c增加,線粒體中的細(xì)胞色素c降低.調(diào)節(jié)線粒體通路中起重要作用的Bcl-2
3、家族也受到影響.Bcl-2家族中重要的促凋亡成員Bax在0.1 μ M力達(dá)霉素處理2 h,6 h,9 h后持續(xù)增加;而抗凋亡成員Bcl-2在0.1 μ M力達(dá)霉素處理2 h,6 h后也增加,但在9 h時(shí)降低.在維持線粒體正常功能中起重要作用的線粒體膜電位(△ψm),在0.01 μ M或0.1μM力達(dá)霉素處理BEL-7402細(xì)胞6 h時(shí)有所增加,而在16 h時(shí)降低.力達(dá)霉素處理BEL-7402細(xì)胞6 h時(shí),p53蛋白的表達(dá)增加.同時(shí),在整
4、體細(xì)胞水平,細(xì)胞色素c和COX 4蛋白有所減少,該變化可以被caspase抑制劑部分抑制.我們還用MTT法檢測了不同劑量的力達(dá)霉素處理以及caspase抑制劑和力達(dá)霉素同時(shí)處理后的BEL-7402細(xì)胞的存活率.用半定量RT-PCR檢測了力達(dá)霉素處理BEL-7402細(xì)胞后,p53和Bax mRNA水平的變化.Bax mRNA水平在力達(dá)霉素處理2 h,6h后有所增加,而p53 mRNA水平基本不變.用瓊脂糖凝膠電泳檢測了力達(dá)霉素處理MCF-
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