線粒體DNA損傷修復系統(tǒng)介導的口腔鱗癌細胞凋亡研究.pdf

1、目的：研究γ射線對口腔鱗狀細胞癌細胞線粒體DNA損傷修復系統(tǒng)相關(guān)基因Tfam、OGG1和POLG表達的影響，并通過抑制線粒體DNA損傷修復系統(tǒng)而增加γ射線不敏感的口腔鱗狀細胞癌細胞的凋亡。 方法：體外培養(yǎng)OSC-2和OSC-5細胞，并用γ射線處理，MTT比色法和流式細胞儀檢測口腔鱗狀細胞癌細胞存活率，氣相色譜/質(zhì)譜(GC/MS)法測定細胞核與線粒體中8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)的含量，DNA聚合酶鏈反應(yīng)檢測mtDNA基因位點

2、的缺失，RNA干涉技術(shù)敲除相關(guān)基因，半定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測相關(guān)mRNA的表達水平，WesternBlot檢測相關(guān)蛋白的表達。 結(jié)果：經(jīng)過30Gyγ射線處理后OSC-2和OSC-5細胞的存活率分別為(35.33±6.03)％和(75.67±4.16)％；nDNA和mtDNA中8-OHdG的含量增加(P＜0.05);△mtDNA也呈現(xiàn)較高水平。OSC-2和OSC-5細胞經(jīng)過γ射線處理后TfammRNA的水平也都升高，但是OSC-5細

3、胞TfammRNA水平存在時相性：即在γ射線處理6小時后TfammRNA水平較高。此外，經(jīng)過γ射線處理的OSC-5細胞中Nrfl向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移較OSC-2細胞更為顯著，OGG1和POLG的表達及pAKT/PI-3K的活性也較強。在經(jīng)PI-3K抑制劑(LY294002)和Akt的抑制劑(AktInhibitorⅥ)處理的細胞中，TfammRNA、OGG1和POLG蛋白表達水平都被下調(diào)。在OSC-5細胞株上單獨使用γ射線并不會誘導mtDNA

4、的缺失，但是經(jīng)過γ射線和PI-3K或Akt抑制劑預(yù)處理后mtDNA有缺失。另外，LY294002或InhibitorⅥ處理后能使細胞TfammRNA的含量、OGG1和POLG蛋白表達減少而8-OHdG合成增加，細胞的凋亡也增加。Tfam、OGG1和POLG各自的siRNA都下調(diào)了相應(yīng)的蛋白表達水平(P＜0.05)。siRNAs轉(zhuǎn)染的細胞經(jīng)30Gyγ射線處理后凋亡數(shù)量有所增加。 結(jié)論：γ射線能上調(diào)射線非敏感的OSC-5細胞中Tfa