毛細(xì)管電泳試樣在線富集新方法研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳(CE)雖然是一種高分辨率的分析技術(shù),但檢測靈敏度低的問題成為限制其在痕量樣品如生物樣品和環(huán)境樣品分析中應(yīng)用的瓶頸。目前已有不同的檢測器用于提高CE的檢測限,但比較有限,所以,主要靠樣品預(yù)富集技術(shù)來解決這個問題。因此,樣品的預(yù)富集方法的發(fā)展成為分析工作者關(guān)注的對象。每種預(yù)富集技術(shù)都有一定的適用范圍和前提條件,針對分析樣品的復(fù)雜性,通常需要利用幾種預(yù)富集技術(shù)的聯(lián)用。預(yù)富集技術(shù)之間、以及預(yù)富集技術(shù)和毛細(xì)管電泳分離之間的耦合程度會對

2、分析結(jié)果的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性產(chǎn)生很大的影響。尤其毛細(xì)管電泳中樣品體積很小,聯(lián)用接口的死體積對分離效率會產(chǎn)生很大的影響。采用耦合程度較好的在線聯(lián)用的方法不僅操作上更簡單,分析結(jié)果的重現(xiàn)性也較好。在本研究中,為了解決固相微萃取(SPME)和CE在線聯(lián)用時,接口死體積對分離效率的影響,以及萃取總量較少的問題,研究了管內(nèi)SPME和CE在線聯(lián)用的新技術(shù),以提高CE的分析靈敏度。
　　 第一章,綜述了CE中常用的樣品預(yù)富集方法。首先從以色譜原理

3、為基礎(chǔ)和以電泳原理為基礎(chǔ)的樣品預(yù)富集方法兩個方面出發(fā)對樣品預(yù)富集技術(shù)進行了綜述,然后介紹了多種預(yù)富集技術(shù)的聯(lián)用,并且對課題中涉及到的SPME和掃集(sweeping)技術(shù)的基本原理進行了介紹。
　　 第二章,在管內(nèi)SPME的基礎(chǔ)上,采用內(nèi)表面涂敷35％苯基甲基聚硅氧烷涂層的毛細(xì)管柱作為微萃取和毛細(xì)管電泳分離的載體,建立了一種開管毛細(xì)管微萃取及電泳掃集在線聯(lián)用的富集技術(shù)(OT-ME-CE)。首先,考察了電泳介質(zhì)的pH值、緩沖鹽及其

4、濃度對涂層柱電泳性質(zhì)的影響,然后考察了影響萃取效率的各種因素,包括樣品溶液的溫度、pH值、洗脫溶液,采用響應(yīng)面優(yōu)化法中星點設(shè)計考察了交互影響的樣品溶液濃度、進樣流速以及進樣時間三因素對萃取效率的影響,還考察了掃集的微乳液的組成和溶液電導(dǎo)率對掃集的影響。在優(yōu)化的條件下,通過對氯雷他定、多沙唑嗪、吲哚美辛以及布洛芬這幾種具有不同疏水性、離解常數(shù)和分子量的藥物化合物進行分析,研究了本方法的可行性。分析了這幾種化合物的濃度線性范圍,并通過計算得

5、到檢測限,考察了方法的靈敏度。考察的線性在10-5至10-3 g·L-1范圍內(nèi),檢測限在10-6 g·L-1水平。通過分別對四種化合物低、中、高三個濃度的樣品進行分析,考察了所建立方法的日內(nèi)、日間重現(xiàn)性和回收率。通過比較四種化合物常規(guī)電泳進樣分析和稀釋500倍后通過本方法分析后各對應(yīng)的峰面積,計算得到四種化合物的富集倍數(shù)。采用優(yōu)化的掃集條件,使用沒有涂層的毛細(xì)管在相同條件下對四種化合物進行分析,考察了本方法與常規(guī)掃集相比富集效率的差異。

6、四種化合物的富集倍數(shù)都達到數(shù)百倍,氯雷他定的富集倍數(shù)最高可達到上千倍。之后,采用本方法測出兔血漿中氯雷他定含量為69.3±6.8μg·L-1,對本方法在生物樣品中低濃度化合物分析的適用性進行了評價。
　　 第三章,利用雙長鏈陽離子表面活性劑雙十八烷基二甲基氯化銨(DDAC)與毛細(xì)管內(nèi)表面硅羥基作用,在毛細(xì)管內(nèi)壁自組裝形成半永久性雙層涂層的性質(zhì),建立了一種自組裝動力學(xué)涂層毛細(xì)管微萃取方法,用于CE中在線富集疏水性化合物。首先,考察

7、了自組裝涂層的穩(wěn)定性受DDAC濃度、涂層時間、溶液流速、pH值、離子強度以及毛細(xì)管內(nèi)徑等因素的影響情況,并且考察了影響富集效率的因素,包括DDAC濃度、涂層時間、樣品進樣時間、樣品溶液中無機鹽含量、樣品溶液pH值、洗脫溶劑。然后,通過對氯雷他定、多沙唑嗪、吲哚美辛以及布洛芬這四種化合物的分析,考察了本方法的可行性?？疾炝怂姆N化合物的濃度線性范圍在10-4至10-2 g·L-1之間,并通過計算得到檢測限在10-5 g·L-1水平,考察了方

8、法的靈敏度。通過分別對四種化合物低、中、高三個濃度的樣品進行分析,考察了所建立方法的日內(nèi)、日間重現(xiàn)性和回收率。通過比較四種化合物常規(guī)電泳進樣進行分析和稀釋后通過本方法分析后各對應(yīng)峰面積,計算得到四種化合物的富集倍數(shù)都達到了數(shù)百倍。
　　 第四章,采用所建立的OT-ME-CE富集方法,對氰戊菊酯、氯吡硫磷和阿維菌素B1b三種農(nóng)藥進行分析。首先考察了影響萃取效率和掃集效率的因素,包括樣品溶液pH值、樣品溶液中的鹽濃度、進樣流速、進樣

9、時間、洗脫溶液、微乳液組成和微乳液濃度。在優(yōu)化條件下,通過對三種化合物進行分析,考察了它們的濃度線性范圍在10-1至102 ppm之間,并通過計算得到檢測限在10-2 ppm水平,考察了方法的靈敏度。通過分別對三種化合物低、中、高三個濃度的樣品進行分析,考察了所建立方法的日內(nèi)重現(xiàn)性、日間重現(xiàn)性和回收率。之后,將這種方法用于小白菜中的阿維菌素B1b殘留的檢測中,測得阿維菌素含量為2.57±0.21 ppm。
　　 第五章,采用第三

10、章建立的方法分析了苯酚,鄰、間和對苯二酚這四種化合物。首先考察了影響富集效率的各種因素,包括樣品進樣時間、樣品溶液中鹽含量、樣品溶液pH值、洗脫溶劑。在優(yōu)化條件下,通過對這四種化合物進行分析,考察了它們的濃度線性范圍從10-5至10-2 g·L-1,并通過計算得到檢測限,考察了方法的檢測靈敏度。通過分別對四種化合物低、中、高三個濃度的樣品進行分析,考察了所建立方法的日內(nèi)、日間重現(xiàn)性和回收率。之后,還測出工廠排出的廢水中的鄰、間、對苯二酚