高效毛細管電泳測定利塞膦酸鈉的方法研究.pdf

1、利塞膦酸鈉（Risedronate，Rsd）屬于第三代雙膦酸鹽類藥物，可抑制破骨細胞介導的骨吸收和調(diào)節(jié)骨代謝，臨床上主要用于變形性骨炎和骨質(zhì)疏松癥等的治療，且未見嚴重不良反應。Rsd口服平均生物利用度小于1％，因此，口服后血漿中Rsd的濃度極低，僅為ng/ml；同時，該化合物分子極性大，給其分析方法的建立帶來極大難度。本論文主要通過毛細管區(qū)帶電泳（Capillary Zone Electrophoresis，CZE）條件的優(yōu)化，并以此為

2、平臺建立了Rsd在原料藥、市售片劑和大鼠血漿中的定量方法。
　　首先考察了緩沖液組成及其pH值和離子濃度，工作電壓，進樣時間等多種影響分離的因素，初步確定的電泳條件為：直徑50μm，有效長度40cm未包被的石英毛細管；pH6.0，濃度為15mM的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液為背景電解質(zhì)；工作電壓+20kV；進樣電壓+20kV，進樣時間8s；溫度25oC；檢測波長262nm。結(jié)果在此條件下Rsd的出峰時間小于5min，具有快速，簡便和低

3、成本的特點。
　　其次建立了原料藥及其市售片劑中Rsd定量檢測方法。Rsd經(jīng)10%H2O2強力破壞發(fā)生快速降解，6h內(nèi)降解了40.5%。考察了檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液pH值和離子濃度對Rsd與降解產(chǎn)物的分離度（Resolution，Rs）的影響。根據(jù)人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會議（ICH）的指導原則進行了方法學驗證，包括專屬性，耐用性，線性（r2=0.9997），靈敏度（檢測限為3μg/ml），準確度（95.32~97.43%）

4、和精密度（%RSD均小于2.26%）。所有破壞性試驗樣品均在210nm和262nm處測定峰面積以進行峰純度分析。作為替代HPLC法分析可解離分子的一種很好的選擇，CZE在本試驗中已成功地應用于市售Rsd片劑含量的測定。
　　論文進一步建立了血漿中Rsd定量檢測方法。血漿樣品的前處理包括三氯乙酸（Trichloroacetic Acid，TCA）除血漿蛋白和堿性條件下鈣離子助沉淀法提取藥物。方法學考察結(jié)果表明血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)對樣品的