結(jié)腸癌細胞中miR-21對5-Fu代謝相關(guān)酶的調(diào)控及其靶基因的驗證.pdf

1、目的:
　　臨床上腫瘤病人耐藥是一個相當棘手的問題，了解耐藥機制迫在眉睫。miR-21可能在結(jié)腸癌耐藥機制中發(fā)揮重要作用，本研究即以探索結(jié)腸癌5-Fu耐藥機制的新線索為目的，可能為臨床個體化治療提供新的預(yù)測指標。
　　方法:
　　本研究選用人結(jié)腸癌HT-29細胞系進行實驗，經(jīng)攜帶不同基因片段的慢病毒轉(zhuǎn)染細胞以調(diào)節(jié)miR-21的表達及作用，采用熒光素酶報告系統(tǒng)驗證hMSH2為miR-21的潛在靶點。此外還采用TaqMan

2、探針法qRT-PCR及Western Blotting兩種技術(shù)方法分別從RNA水平及蛋白分子水平來檢測隨著miR-21的調(diào)節(jié)5-Fu代謝相關(guān)酶及hMSH2表達量的變化。
　　結(jié)果:
　　1、熒光素酶報告基因檢測hMSH2為miR-21的潛在靶基因。miR-21下調(diào)組熒光素酶活性明顯增強(p＜0.001)，而miR-21上調(diào)組的熒光素酶活性明顯減弱(p＜0.001)，結(jié)果表明miR-21能夠直接靶向結(jié)合于hMSH2的3'UTR

3、端。
　　2、TaqMan探針法實時熒光定量PCR從RNA水平進一步驗證了miR-21對hMSH2的靶向作用，此外還表明miR-21與TP酶、DPD酶的表達存在負性調(diào)節(jié)作用(p＜0.05)。
　　3、在蛋白水平上通過Western Blotting發(fā)現(xiàn)miR-21對hMSH2以及TP酶、DPD酶表達的影響趨勢與RNA水平相一致，但對TS酶的表達無明顯影響。
　　結(jié)論:
　　hMSH2是miR-21的潛在靶基因，同