VE-Cad-Fc融合蛋白改性納米纖維支架促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、細(xì)胞外微環(huán)境的仿生構(gòu)建是組織工程和再生醫(yī)學(xué)的研究焦點(diǎn)，對(duì)細(xì)胞的增殖、遷移及其功能表達(dá)都起著重要的調(diào)節(jié)作用。近年利用基因重組技術(shù)制備的多功能融合蛋白細(xì)胞外基質(zhì)與納米纖維三維細(xì)胞支架的研究已引起研究者的廣泛關(guān)注。本文旨在擬開發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子型融合蛋白細(xì)胞外基質(zhì)，并用于納米纖維支架的表面改性，改善納米纖維血管支架的內(nèi)皮細(xì)胞特異親和性，研究其促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的選擇性粘附與增殖的作用，為細(xì)胞外微環(huán)境的仿生構(gòu)建提供一定的理論與實(shí)踐指導(dǎo)。
　　

2、 本文利用水接觸角實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了VE-cad-Fc對(duì)聚苯乙烯表面親水性的影響，結(jié)果表明通過Fc功能域與疏水材料表面的疏水作用，VE-cad-Fc穩(wěn)定地吸附在疏水材料聚苯乙烯表面，并且顯著提高了聚苯乙烯表面的親水性。VE-cad-Fc基質(zhì)用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)培養(yǎng)，MTT法檢測(cè)細(xì)胞粘附、增殖結(jié)果表明:融合蛋白VE-cad-Fc濃度為5μg/ml時(shí)，形成的人工細(xì)胞外基質(zhì)最適合內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，且該基質(zhì)能顯著地提高內(nèi)皮細(xì)胞的選擇性粘附及

3、其增殖，同時(shí)這種基質(zhì)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的粘附具有鈣離子依賴性。此外，細(xì)胞骨架與免疫組化染色實(shí)驗(yàn)表明融合蛋白VE-cad-Fc基質(zhì)能促進(jìn)HUVEC伸展，表達(dá)大量應(yīng)力纖維(F-actin)并形成絲狀偽足，同時(shí)能顯著地提高內(nèi)皮細(xì)胞功能性分子（vWF、VE-cadherin）的表達(dá)。為了進(jìn)一步促進(jìn)血管納米纖維支架的快速內(nèi)皮化，論文中我們通過控制靜電紡絲過程中的電紡制備條件參數(shù)，成功地制備了纖維直徑均一、孔隙均勻、厚度可控的PCL納米纖維支架。根據(jù)上述蛋

4、白固定方法，VE-cad-Fc對(duì)PCL納米纖維支架進(jìn)行了表面改性。MTT法檢測(cè)表明，經(jīng)VE-cad-Fc修飾的PCL納米纖維支架可以顯著提高內(nèi)皮細(xì)胞的粘附與增殖。細(xì)胞骨架與免疫組化染色實(shí)驗(yàn)表明VE-cad-Fc能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的延伸，同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞功能性分子（vWF）的表達(dá)量明顯提高。該研究結(jié)果表明，在VE-cad-Fc與納米纖維協(xié)同作用下，VE-Cad-Fc改性PCL納米纖維支架有望成為誘導(dǎo)血管支架材料表面快速內(nèi)皮化、改善支架血液相容性的