VE-Cad-Fc融合蛋白改性納米纖維支架促進內(nèi)皮細胞增殖的研究.pdf

1、細胞外微環(huán)境的仿生構(gòu)建是組織工程和再生醫(yī)學(xué)的研究焦點，對細胞的增殖、遷移及其功能表達都起著重要的調(diào)節(jié)作用。近年利用基因重組技術(shù)制備的多功能融合蛋白細胞外基質(zhì)與納米纖維三維細胞支架的研究已引起研究者的廣泛關(guān)注。本文旨在擬開發(fā)內(nèi)皮細胞粘附因子型融合蛋白細胞外基質(zhì)，并用于納米纖維支架的表面改性，改善納米纖維血管支架的內(nèi)皮細胞特異親和性，研究其促進內(nèi)皮細胞的選擇性粘附與增殖的作用，為細胞外微環(huán)境的仿生構(gòu)建提供一定的理論與實踐指導(dǎo)。
　　

2、 本文利用水接觸角實驗檢測了VE-cad-Fc對聚苯乙烯表面親水性的影響，結(jié)果表明通過Fc功能域與疏水材料表面的疏水作用，VE-cad-Fc穩(wěn)定地吸附在疏水材料聚苯乙烯表面，并且顯著提高了聚苯乙烯表面的親水性。VE-cad-Fc基質(zhì)用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)培養(yǎng)，MTT法檢測細胞粘附、增殖結(jié)果表明:融合蛋白VE-cad-Fc濃度為5μg/ml時，形成的人工細胞外基質(zhì)最適合內(nèi)皮細胞的生長，且該基質(zhì)能顯著地提高內(nèi)皮細胞的選擇性粘附及

3、其增殖，同時這種基質(zhì)對內(nèi)皮細胞的粘附具有鈣離子依賴性。此外，細胞骨架與免疫組化染色實驗表明融合蛋白VE-cad-Fc基質(zhì)能促進HUVEC伸展，表達大量應(yīng)力纖維(F-actin)并形成絲狀偽足，同時能顯著地提高內(nèi)皮細胞功能性分子（vWF、VE-cadherin）的表達。為了進一步促進血管納米纖維支架的快速內(nèi)皮化，論文中我們通過控制靜電紡絲過程中的電紡制備條件參數(shù)，成功地制備了纖維直徑均一、孔隙均勻、厚度可控的PCL納米纖維支架。根據(jù)上述蛋

4、白固定方法，VE-cad-Fc對PCL納米纖維支架進行了表面改性。MTT法檢測表明，經(jīng)VE-cad-Fc修飾的PCL納米纖維支架可以顯著提高內(nèi)皮細胞的粘附與增殖。細胞骨架與免疫組化染色實驗表明VE-cad-Fc能促進內(nèi)皮細胞的延伸，同時內(nèi)皮細胞功能性分子（vWF）的表達量明顯提高。該研究結(jié)果表明，在VE-cad-Fc與納米纖維協(xié)同作用下，VE-Cad-Fc改性PCL納米纖維支架有望成為誘導(dǎo)血管支架材料表面快速內(nèi)皮化、改善支架血液相容性的