內(nèi)皮細(xì)胞靶向的D1R融合蛋白促進(jìn)骨髓和肝臟造血干-祖細(xì)胞植入的研究.pdf

1、目前造血干細(xì)胞移植已經(jīng)成為臨床治療血液病和血液系統(tǒng)惡性腫瘤的重要手段之一,其中骨髓、外周血和臍血是其造血干細(xì)胞的重要來源。由于臍血來源豐富、采集方便、免疫原性弱,又較骨髓和外周血移植有更多優(yōu)勢(shì),因此,近年來臍血移植越來越受到重視。然而,由于臍血造血干/祖細(xì)胞含量較低,難以滿足成年及體重較大患者的需要;且臍血移植后造血重建延遲、感染性并發(fā)癥增加,很難收到滿意的療效,已嚴(yán)重限制其在臨床中的應(yīng)用。如何有效地獲取足量的造血干細(xì)胞以滿足臨床需要,

2、已成為一個(gè)亟待解決的問題。
　　大量的研究表明,Notch信號(hào)途徑是調(diào)控干細(xì)胞增殖分化的重要信號(hào)通路之一, Notch受體和配體在造血系統(tǒng)廣泛表達(dá),激活Notch信號(hào)通路能夠促進(jìn)HSCs的自我更新,這為有效獲取足量的HSCs提供了新的思路。本課題以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞作為培養(yǎng)體系的支持細(xì)胞,模擬造血干細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境,聯(lián)合應(yīng)用外源性生長(zhǎng)因子 SCF、TPO、FL、IL-6、IL-3及一種內(nèi)皮細(xì)胞靶向的Notch配體D1R(人D1R,h

3、D1R),與造血干/祖細(xì)胞共培養(yǎng),建立一種有效的體外擴(kuò)增體系,并通過給照射小鼠體內(nèi)直接注射D1R蛋白,重點(diǎn)觀察了其對(duì)HSPCs在骨髓、肝臟的植入和對(duì)造血微環(huán)境的影響,進(jìn)一步分析了內(nèi)皮細(xì)胞靶向的Notch配體激活的Notch信號(hào)在維持造血干/祖細(xì)胞自我更新、促進(jìn)植入的重要作用及相關(guān)機(jī)制。
　　研究結(jié)論如下:
　　1、建立了基于 Notch信號(hào)調(diào)節(jié)的體外培養(yǎng)體系,明顯地?cái)U(kuò)增了小鼠的造血干/祖細(xì)胞,并通過體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)證明了擴(kuò)增的造

4、血細(xì)胞具有長(zhǎng)期造血重建的能力。提示D1R激活的Notch信號(hào)維持了HSPCs自我更新的特性,促進(jìn)了增殖。
　　2、在照射小鼠造血損傷實(shí)驗(yàn)中,同時(shí)給照射小鼠體內(nèi)注射 D1R融合蛋白,有效地保護(hù)了造血微環(huán)境,顯著地?cái)U(kuò)增了體內(nèi)殘存的HSPCs,并通過骨髓移植實(shí)驗(yàn)證明擴(kuò)增的體內(nèi)HSPCs具有造血重建的能力。
　　3、在小鼠骨髓移植實(shí)驗(yàn)中,直接給移植后的受體小鼠注射 D1R融合蛋白,有效地促進(jìn)了供體細(xì)胞在骨髓、肝臟、脾臟的植入,并通過

5、在肝臟、脾臟誘導(dǎo)形成血管龕樣的結(jié)構(gòu)支持?jǐn)U增了供體細(xì)胞,提高小鼠存活率,并且降低了小鼠造血重建所需的最低造血細(xì)胞數(shù)量。
　　4、利用已建立的體外培養(yǎng)體系,有效地?cái)U(kuò)增了人臍血 CD34+細(xì)胞,并通過NOD/SCID小鼠體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)證明了擴(kuò)增的造血細(xì)胞具有造血重建的能力。
　　綜上所述,我們通過內(nèi)皮細(xì)胞靶向的Notch配體(D1R、hD1R)建立了有效的體外擴(kuò)增體系,并首次將D1R融合蛋白直接在小鼠體內(nèi)應(yīng)用,重點(diǎn)觀察了其對(duì)HSPC