內皮細胞靶向的D1R融合蛋白促進骨髓和肝臟造血干-祖細胞植入的研究.pdf

1、目前造血干細胞移植已經成為臨床治療血液病和血液系統(tǒng)惡性腫瘤的重要手段之一,其中骨髓、外周血和臍血是其造血干細胞的重要來源。由于臍血來源豐富、采集方便、免疫原性弱,又較骨髓和外周血移植有更多優(yōu)勢,因此,近年來臍血移植越來越受到重視。然而,由于臍血造血干/祖細胞含量較低,難以滿足成年及體重較大患者的需要;且臍血移植后造血重建延遲、感染性并發(fā)癥增加,很難收到滿意的療效,已嚴重限制其在臨床中的應用。如何有效地獲取足量的造血干細胞以滿足臨床需要,

2、已成為一個亟待解決的問題。
　　大量的研究表明,Notch信號途徑是調控干細胞增殖分化的重要信號通路之一, Notch受體和配體在造血系統(tǒng)廣泛表達,激活Notch信號通路能夠促進HSCs的自我更新,這為有效獲取足量的HSCs提供了新的思路。本課題以人臍靜脈內皮細胞作為培養(yǎng)體系的支持細胞,模擬造血干細胞生長的微環(huán)境,聯(lián)合應用外源性生長因子 SCF、TPO、FL、IL-6、IL-3及一種內皮細胞靶向的Notch配體D1R(人D1R,h

3、D1R),與造血干/祖細胞共培養(yǎng),建立一種有效的體外擴增體系,并通過給照射小鼠體內直接注射D1R蛋白,重點觀察了其對HSPCs在骨髓、肝臟的植入和對造血微環(huán)境的影響,進一步分析了內皮細胞靶向的Notch配體激活的Notch信號在維持造血干/祖細胞自我更新、促進植入的重要作用及相關機制。
　　研究結論如下:
　　1、建立了基于 Notch信號調節(jié)的體外培養(yǎng)體系,明顯地擴增了小鼠的造血干/祖細胞,并通過體內移植實驗證明了擴增的造

4、血細胞具有長期造血重建的能力。提示D1R激活的Notch信號維持了HSPCs自我更新的特性,促進了增殖。
　　2、在照射小鼠造血損傷實驗中,同時給照射小鼠體內注射 D1R融合蛋白,有效地保護了造血微環(huán)境,顯著地擴增了體內殘存的HSPCs,并通過骨髓移植實驗證明擴增的體內HSPCs具有造血重建的能力。
　　3、在小鼠骨髓移植實驗中,直接給移植后的受體小鼠注射 D1R融合蛋白,有效地促進了供體細胞在骨髓、肝臟、脾臟的植入,并通過

5、在肝臟、脾臟誘導形成血管龕樣的結構支持擴增了供體細胞,提高小鼠存活率,并且降低了小鼠造血重建所需的最低造血細胞數量。
　　4、利用已建立的體外培養(yǎng)體系,有效地擴增了人臍血 CD34+細胞,并通過NOD/SCID小鼠體內移植實驗證明了擴增的造血細胞具有造血重建的能力。
　　綜上所述,我們通過內皮細胞靶向的Notch配體(D1R、hD1R)建立了有效的體外擴增體系,并首次將D1R融合蛋白直接在小鼠體內應用,重點觀察了其對HSPC