RNA干擾抑制RPA70表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞放射敏感性影響的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察RPA70的mRNA及其蛋白在食管癌TE-1細(xì)胞中的表達(dá)情況；觀察RPA70基因特異性反義寡核苷酸(AS-RPA-70)對(duì)食管癌TE-1細(xì)胞中RPA70的mRNA及其蛋白表達(dá)的影響；探討特異性阻斷RPA70基因表達(dá)后聯(lián)合不同劑量的X線照射對(duì)食管癌TE-1細(xì)胞增殖、凋亡的影響。
　　方法：使用食管癌TE-1細(xì)胞株，利用RT-PCR和免疫組化法分別檢測該細(xì)胞中RPA70的mRNA及其蛋白的表達(dá)情況；使用脂質(zhì)體2000介導(dǎo)，采

2、用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染RPA70特異性反義寡核苷酸(AS-RPA-70)及陰性對(duì)照寡核苷酸于食管癌TE-1細(xì)胞中，設(shè)實(shí)驗(yàn)組(RPA70基因特異性反義寡核苷酸)、陰性對(duì)照組(陰性對(duì)照寡核苷酸)、Mock組(加入轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體2000)及空白對(duì)照組(只加入無血清培養(yǎng)基Opti-MEM)，在24、48、72、96小時(shí)四個(gè)轉(zhuǎn)染時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察；使用RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot法分別檢測各組、各時(shí)間段食管癌

3、TE-1細(xì)胞中RPA70的mRNA及其蛋白的表達(dá)情況；用CCK-8法、流式細(xì)胞儀分別檢測AS-RPA-70轉(zhuǎn)染后96h聯(lián)合輻射對(duì)食管癌TE-1細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　結(jié)果：RPA70的mRNA及其蛋白在食管癌TE-1細(xì)胞中均有表達(dá)；RT-PCR、qRT-PCR法結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染后RPA70的mRNA含量在72h達(dá)到最低，Westernblot法結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染后RPA70的蛋白表達(dá)在96h達(dá)到最低，其他各對(duì)照組轉(zhuǎn)染后RPA

4、70的mRNA及其蛋白含量無明顯改變；細(xì)胞增殖及凋亡分析結(jié)果示AS-RPA-70轉(zhuǎn)染后96h聯(lián)合放射可明顯抑制食管癌TE-1細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞抑制率和凋亡率明顯高于各對(duì)照組。(P<0.05)
　　結(jié)論：1.食管癌TE-1細(xì)胞中存在RPA70的mRNA及其蛋白的表達(dá)
　　2.AS-RPA-70能夠有效地抑制食管癌TE-1細(xì)胞的mRNA及其蛋白的表達(dá)
　　3.AS-RPA-70聯(lián)合輻射可明顯抑制食管癌TE