新型脫細(xì)胞腦組織修復(fù)支架植入大鼠腦內(nèi)的組織學(xué)觀察.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)初步制備的脫細(xì)胞腦組織修復(fù)支架植入大鼠腦損傷灶后的組織學(xué)觀察，了解修復(fù)支架材料的組織相容性及對(duì)腦損傷后再生和修復(fù)的影響，為研制出理想的新型脫細(xì)胞腦組織修復(fù)支架提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法： 1、修復(fù)支架制備：利用脫細(xì)胞、去抗原方法將出生后14天SD大鼠皮層腦組織制備成脫細(xì)胞腦組織修復(fù)支架材料，HE染色觀察支架材料內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 2、修復(fù)支架植入：45只SD大鼠隨機(jī)分為3組，通過(guò)外科手術(shù)制備出大鼠運(yùn)動(dòng)皮層缺損

2、模型，然后支架組(n=15)植入脫細(xì)胞支架材料于腦缺損灶；明膠海綿組(n=15)植入醫(yī)用無(wú)菌明膠海綿塊；單純損傷組(n=15)不植入任何材料。 3、行為評(píng)分：分別于術(shù)后第3天、第7天、第14天行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。 4、組織學(xué)觀察：術(shù)后第3天、第7天、第14天、第30天、第60天、第90天分別從不同實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)選取兩只大鼠進(jìn)行蘇木素一伊紅(Hematoxylin-Eosin，HE)染色觀察材料與宿主腦組織的相容性；并于術(shù)后第3

3、天、第7天、第14天、第30天行膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein，GFAP)免疫熒光檢查，觀察缺損區(qū)周圍腦組織星形膠質(zhì)細(xì)胞的增生反應(yīng)；術(shù)后第3天、第7天，行神經(jīng)巢蛋白(Neuroepithelial stem cell protein，Nestin)免疫熒光觀察缺損灶周圍神經(jīng)干細(xì)胞的聚集情況。 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：對(duì)行為評(píng)分、GFAP陽(yáng)性細(xì)胞率和Nestin陽(yáng)性細(xì)胞率分別使用單因素方差

4、分析和LSD檢驗(yàn)進(jìn)行3個(gè)實(shí)驗(yàn)組組間兩兩比較的顯著性檢驗(yàn)(取a=0.05)。 結(jié)果： 1、支架結(jié)構(gòu)：新型脫細(xì)胞腦組織修復(fù)支架具有三維多孔結(jié)構(gòu)，且孔徑大小相近，直徑平均約90μm，腦內(nèi)植入后能維持結(jié)構(gòu)不變。 2、組織相容性：術(shù)后第3天、第7天，3組均發(fā)現(xiàn)有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，以淋巴細(xì)胞為主，并有少量中性粒細(xì)胞；支架組與明膠海綿組無(wú)明顯差別，單純損傷組炎癥細(xì)胞最少。術(shù)后第14天，支架組與明膠海綿組有巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，兩組無(wú)明

5、顯差別；單純損傷組未發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞，僅少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。術(shù)后第30至第90天，支架組仍有淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)并逐漸減少；明膠海綿組隨著術(shù)后第30天明膠海綿降解后巨噬細(xì)胞消失，僅殘存少量淋巴細(xì)胞并逐漸減少；單純損傷組淋巴細(xì)胞逐漸減少并于術(shù)后第90天消失。 3、支架與腦組織整合及降解：術(shù)后第3天，支架與宿主腦組織疏松整合；術(shù)后第7天，支架較緊密粘附于宿主腦組織；術(shù)后第60天，支架多孔結(jié)構(gòu)塌陷并逐漸降解；術(shù)后第90天，支架大部分降解，

6、降解過(guò)程未發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞增多。 4、GFAP免疫熒光：缺損區(qū)周圍GFAP陽(yáng)性細(xì)胞率于術(shù)后第3天，3組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；術(shù)后第7天至第30天，支架組低于單純損傷組(P<0.05)； 5、Nestin免疫熒光：術(shù)后第3天及第7天，Nestin陽(yáng)性細(xì)胞于缺損區(qū)周圍聚集，支架組缺損區(qū)周圍Nestin陽(yáng)性細(xì)胞率明顯高于其它兩組(P<0.05)。 6、行為評(píng)分觀察：術(shù)后各組神經(jīng)功能均存在明顯缺失，之后逐漸得到

7、部分恢復(fù)；術(shù)后第7天支架組神經(jīng)行為評(píng)分高于明膠海綿組及單純損傷組(P<0.05)；其他時(shí)間段評(píng)分各組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： 1、新型脫細(xì)胞腦組織修復(fù)支架植入腦內(nèi)后能維持三維多孔結(jié)構(gòu)，可生物降解，降解產(chǎn)物不引起明顯的炎癥反應(yīng)。 2、新型脫細(xì)胞腦組織修復(fù)支架植入腦內(nèi)后炎癥反應(yīng)輕，有較好的生物相容性。 3、新型脫細(xì)胞腦組織修復(fù)支架早期可在一定程度上減輕星形膠質(zhì)細(xì)胞的增生反應(yīng)。 4、