rhEPO上調(diào)TBI大鼠循環(huán)血內(nèi)皮祖細(xì)胞并促進(jìn)損傷腦組織的神經(jīng)血管修復(fù).pdf

1、目的:研究重組人源紅細(xì)胞生成素誘導(dǎo)創(chuàng)傷性腦損傷Wistar大鼠模型循環(huán)血內(nèi)皮祖細(xì)胞動員、促進(jìn)創(chuàng)傷后腦組織神經(jīng)血管修復(fù)的作用及其潛在的細(xì)胞學(xué)機(jī)制。
　　 方法:健康雄性Wistar大鼠174只,體重300-350g,隨機(jī)分為Ⅰ批(n=144)和Ⅱ批(n=30)。Ⅰ批分為Sham(假損傷)組、TBI+Saline(生理鹽水)組及TBI+rhEPO(重組人源紅細(xì)胞生成素)組,每組均n=48。Ⅰ批三個組再根據(jù)TBI動物模型的制模時間,設(shè)

2、定傷后3h,6h,24h,3d,7d,14d共6個觀測時間點(diǎn),每個時間點(diǎn)均隨機(jī)選取大鼠n=8只。Ⅱ批分為Sham組、TBI+Saline組及TBI+rhEPO組,每組均有大鼠n=10。大鼠TBI模型制備采用液壓顱腦損傷儀,給予1.5-2.0atm液壓沖擊力,制成中型液壓顱腦損傷模型。分別于致傷后相應(yīng)觀察時間點(diǎn)對Ⅰ批各組大鼠進(jìn)行眼內(nèi)骴靜脈取血、斷頭取腦。采用流式細(xì)胞儀檢測循環(huán)血中CD34+、CD133+細(xì)胞即EPCs的水平,采用免疫熒光染

3、色觀察TBI創(chuàng)傷組織海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)的CD31+細(xì)胞的表達(dá)變化,即新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的變化。同時,對Ⅱ批各組大鼠進(jìn)行Morris水迷宮試驗和神經(jīng)功能損傷評分實驗,以分別評定TBI大鼠在不同干預(yù)條件下空間學(xué)習(xí)和記憶能力變化和rhEPO對TBI大鼠神經(jīng)功能修復(fù)作用。
　　 結(jié)果:1.與Sham組相比,TBI+Saline組及TBI+rhEPO組大鼠循環(huán)血EPCs水平總體上呈現(xiàn)先低后高的變化趨勢,但TBI+rhEPO組6h后循環(huán)血EPCs

4、明顯較TBI+Saline組升高,且維持高EPCs水平至7d達(dá)到最高點(diǎn),然后開始降低,相反,TBI+Saline組循環(huán)血EPCs的水平損傷后即呈低水平,然后開始逐漸升高,到6h后開始下降,直至正常水平。2.與Sham組相比,傷后1d時間點(diǎn)的TBI+Saline和TBI+rhEPO組海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)的CD31+表達(dá)明顯增加,TBI+Saline和TBI+rhEPO組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。傷后7d時間點(diǎn)的TBI+Saline和TBI+rhEPO組

5、海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)CD31+表達(dá)也比sham組相比增強(qiáng),與TBI+Saline相比,TBI+rhEPO組大鼠CD31+表達(dá)增高且具有統(tǒng)計學(xué)意義。3.水迷宮實驗顯示,整體上各組大鼠隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加,在目標(biāo)象限所花時間的百分率逐漸增加。與TBI+Saline組相比,TBI+rhEPO老鼠的目標(biāo)象限百分率從第四天明顯增加(P<0.05)。神經(jīng)功能損傷評分實驗顯示TBI+rhEPO從第14天開始其NSS評分與TBI+Saline組相比顯著降低(P