多溴聯(lián)苯醚的酶聯(lián)免疫吸附分析的研究.pdf

1、多溴聯(lián)苯醚是一種被廣泛使用于電子、紡織、建材等工業(yè)領(lǐng)域的溴代阻燃劑，現(xiàn)已被列為新型持久性有機(jī)污染物質(zhì)之一。該物質(zhì)性質(zhì)穩(wěn)定難降解且具有很強(qiáng)的親脂疏水性，因此可以在生物體內(nèi)富集并產(chǎn)生積累放大效應(yīng)，并伴隨蒸發(fā)-冷凝等環(huán)境行為遠(yuǎn)距離、多介質(zhì)傳輸，因此廣泛存在于空氣、水體、土壤、生物體內(nèi)。多溴聯(lián)苯醚具有多方面的毒性危害，即使是微量存在也會(huì)對(duì)人體健康及生態(tài)環(huán)境造成不良影響。
　　酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme-linked immunosor

2、bent assay，ELISA)作為一種高效的免疫生物分析技術(shù)，具有靈敏、快速、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，尤其是要求對(duì)大量環(huán)境樣品的進(jìn)行初期篩選時(shí)很有優(yōu)勢(shì)，可大幅度提高監(jiān)測(cè)工作效率，同時(shí)降低監(jiān)測(cè)成本，為儀器檢測(cè)提供有效依據(jù)。本文旨在建立一種針對(duì)于多溴聯(lián)苯醚的ELISA分析方法，為其快速有效檢測(cè)提供理論依據(jù)。
　　首先，本文根據(jù)多溴聯(lián)苯醚(poly brominated diphenyl ethers，PBDEs)中BDE-47為代表研究物

3、質(zhì)，通過改造其分子結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)合成半抗原C15H9Br3O3和C11H13Br2O3N，利用1H核磁共振波譜(1HNMR)和高分辨電子轟擊質(zhì)譜（HREI-MS）進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，并分別與載體蛋白偶聯(lián)后得到免疫原和包被原。使用免疫原對(duì)四只新西蘭大白兔進(jìn)行7次免疫后取得特異性抗血清。建立ELISA檢測(cè)方法，實(shí)驗(yàn)測(cè)定半抗原C15H9Br3O3-鎖孔血藍(lán)蛋白(K1-KLH)抗體效價(jià)為1∶32000，對(duì)目標(biāo)化合物BDE-47的IC50為0.776mg

4、/L，檢出限為0.081mg/L;實(shí)驗(yàn)測(cè)定半抗原C15H9Br3O3-牛血清白蛋白(K1-BSA)抗體效價(jià)為1∶400000，對(duì)目標(biāo)化合物BDE-47的IC50為0.130mg/L，檢出限為0.01mg/L。
　　其次，為評(píng)價(jià)所建立的間接競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA，本文建立傳統(tǒng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器分析方法及商品化ELISA試劑盒檢測(cè)作為驗(yàn)證方法，并分別建立針對(duì)BDE-47的儀器檢測(cè)和ELISA檢測(cè)的環(huán)境樣品前處理方法。分別使用間接競(jìng)爭(zhēng)抑

5、制ELISA，氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)儀器分析方法及ELISA試劑盒對(duì)采集的大沽排污河水樣、底泥及海河常見魚樣處理后進(jìn)行檢測(cè)后對(duì)比分析檢驗(yàn)結(jié)果，三種檢測(cè)法均可滿足富集后的環(huán)境樣品的檢測(cè)要求。
　　最后，以渤海灣近岸海域?yàn)檠芯繀^(qū)域，采集水樣、底泥（上層、中層、底層）、魚樣后，采用所建立的ELISA試劑盒分析方法及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器分析方法進(jìn)行檢測(cè)，分析PBDEs污染特征。分析結(jié)果表明，水體溶解相及魚體內(nèi)主要以BDE-28，B