酶聯(lián)免疫吸附法在乳制品中的應(yīng)用

1、酶聯(lián)免疫吸附法在乳制品檢測(cè)中的應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法在乳制品檢測(cè)中的應(yīng)用摘要:簡(jiǎn)單介紹了酶聯(lián)免疚吸附法（ELISA）并且就其在乳制品檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行了較詳細(xì)的評(píng)述主要包ELISA用于乳制品中的免疫球蛋白、乳鐵蛋白、微生物及其他成分的測(cè)定。關(guān)健詞：關(guān)健詞：酶聯(lián)免疫吸附法，乳制品，檢測(cè)Abstract:Theenzymelinkedimmunosbentassay(ELISA)wereintroducedbrieflyapplicationof

2、ELISAinmilkproductsanalysiswerealsostudiedincludingthedeterminationofimmunoglobulinlaotoferrinmicroganismaswellastheothercomponents.Keywds:ELISAmilkproductsdetermination1引言引言我國(guó)的食品安全問(wèn)題已不再單純的是一般的質(zhì)量問(wèn)題，食品自然甚至人為地污染日趨多樣化和復(fù)雜化，緊

3、抓食品安全控制成為了關(guān)系國(guó)計(jì)民生的大事，人民和政府的高度重視迫使食品科技不斷增加新的檢驗(yàn)項(xiàng)目，特別是隨著生活質(zhì)量的提高，人們對(duì)于乳制品的需求越來(lái)越大，乳制品的安全檢測(cè)問(wèn)題也就越發(fā)突出。利用新的科技手段不斷提高檢驗(yàn)水平、質(zhì)量和效率?，F(xiàn)今，食品安全檢測(cè)正朝著快速、靈敏、簡(jiǎn)便的方向發(fā)展。酶聯(lián)免疫技術(shù)正是迎合了這一方向而被越來(lái)越多地應(yīng)用于乳制品檢驗(yàn)領(lǐng)域的。2酶聯(lián)免疫吸附法的概述酶聯(lián)免疫吸附法的概述酶聯(lián)免疫吸附法(EnzymeLinkedImmu

4、nesbentAssay簡(jiǎn)稱ELISA)又稱酶標(biāo)法是在20世紀(jì)60年代在免疫熒光和組織化學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù)，1966年Nakane和Avrameas首先用酶標(biāo)記抗體在普通光學(xué)顯微鏡下定位抗原。1971年Engvall和Perlman以及Weeman和Schuurs仿照放射免疫測(cè)定法(RIA)的競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定原理使酶標(biāo)抗原與待測(cè)標(biāo)本中的未標(biāo)記的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合一定量的抗體然后分離游離的和結(jié)合的標(biāo)記抗原測(cè)定酶活性即可得到待測(cè)抗原量。次年E

5、ngvall等改用酶標(biāo)記免疫球蛋白提高了標(biāo)記效率避免了半抗原標(biāo)記困難的問(wèn)題也簡(jiǎn)化了操作手續(xù)[1]。目前ELISA技術(shù)已廣泛應(yīng)用在臨床醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域的檢測(cè)中但在食品安全領(lǐng)域中應(yīng)用相對(duì)較少。因此ELISA在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用仍有待于進(jìn)一步的深入研究。由于ELISA檢測(cè)技術(shù)特異性高、靈敏性強(qiáng)并且食品安全問(wèn)題日益受到消費(fèi)者、學(xué)術(shù)界和各級(jí)政府的密切關(guān)注所以ELISA在食品安全檢測(cè)中的研究和應(yīng)用也越來(lái)越多。本文主要對(duì)ELISA法原理、

6、分類及在乳制品檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行了綜述希望能對(duì)ELISA在乳制品檢測(cè)中的發(fā)展起到一定的作用。3ELISA的測(cè)定原理和方法的測(cè)定原理和方法3.1ELISA的測(cè)定原理的測(cè)定原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記即利用聚苯乙烯微4.2檢測(cè)乳鐵蛋白檢測(cè)乳鐵蛋白乳鐵蛋白（Lactoferrin簡(jiǎn)稱Lf)和免疫球蛋白Ig一樣也是體液中一種免疫因子具有許多生理活性?？咕驼{(diào)整腸胃徽生物類群的作用；刺激和強(qiáng)化鐵的吸收；控制鐵催化

7、的自由基形成反應(yīng)的抗氧化作用，以及抗病毒效應(yīng)等等。在嬰兒配方奶粉保健乳粉中，鐵蛋白是不可缺少的一種活性成分。張英華[7]等應(yīng)用ELISA檢測(cè)乳鐵蛋白的含量最小檢出量為0.5ngml，線性范圍0.8ngml~100ngml，與目前通常采用的高效液相色譜(HPLC)相比具有快速、簡(jiǎn)便、可同時(shí)檢測(cè)幾十個(gè)甚至幾百個(gè)試樣的優(yōu)點(diǎn)。ng……109g4.3檢測(cè)乳制品中的殘留農(nóng)藥檢測(cè)乳制品中的殘留農(nóng)藥藥物殘留分析從20世紀(jì)50年代就開(kāi)始應(yīng)用至今經(jīng)歷了氣相

8、色譜法、高效液相色譜法、高效薄層色譜法、超臨界流體色譜法、毛細(xì)管區(qū)域電泳法和免疫分析法。馮秀瓊[8]對(duì)1998年前的農(nóng)藥殘留分析技術(shù)的發(fā)展進(jìn)行了概括BGevao等[9]對(duì)近年來(lái)農(nóng)藥殘留分析的主流方法進(jìn)行了綜述。藥物殘留分析是復(fù)雜的混合物中痕量組分的分析技術(shù)既需要精細(xì)的微量操作手段又需要高靈敏度的痕量檢測(cè)技術(shù)難度大、儀器化程度和分析成本高為藥物殘留分析帶來(lái)一定難度。隨著科技的發(fā)展更多的新技術(shù)和方法也將應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐如生物傳感器方法和熒光免

9、疫法納米科技、遠(yuǎn)紅外和中紅外也將應(yīng)用于藥物殘留的檢測(cè)中。但所有的這些方法都需要有精密的大型儀器只能適合于中心實(shí)驗(yàn)室或作為確證。高敏感性的快速檢測(cè)方法和試劑盒則成為保障無(wú)殘留的最重要的手段。因此在生產(chǎn)中趨向研究更為靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)方法如ELISA檢測(cè)試劑盒[10]。王升吉等[11]論述了免疫分析法在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用及前景。農(nóng)藥屬于小分子物質(zhì)是一種半抗原無(wú)免疫原性。所以檢測(cè)時(shí)首先選用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)農(nóng)藥含量。磺胺及其衍生物是常用的

10、廣譜抗菌獸藥廣泛應(yīng)用于乳牛傳染病的預(yù)防和治療。含磺胺及其衍生物的乳制品能影響核酸的合成破壞機(jī)體正常菌群生態(tài)平衡對(duì)人體健康會(huì)產(chǎn)生不良影響。吳定以牛血清蛋白和卵蛋白兩種不同的載體包被抗原建立牛乳中磺胺甲基嘧啶的ELISA測(cè)定。Thomson等[12]也應(yīng)用ELISA檢測(cè)牛乳中磺胺噬唑殘留量。4.4檢測(cè)乳制品中的微生物檢測(cè)乳制品中的微生物微生物檢測(cè)通常以分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)及血清學(xué)試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行判定其步驟煩瑣工作量大時(shí)間長(zhǎng)(67d)而應(yīng)用ELISA

11、檢鍘微生物的優(yōu)點(diǎn)正受到人們?cè)絹?lái)越多的關(guān)注。乳制品的營(yíng)養(yǎng)成分很豐富非常適合多種類群微生物的生長(zhǎng)和繁殖。沙門氏菌是引起細(xì)菌性食物中毒的主要致病菌之一乳制品的微物檢驗(yàn)必須包括沙門氏菌這一項(xiàng)。文其乙等[13](1996年)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用直接ELISA方法對(duì)500份蛋品檢測(cè)表明方法可靠且陽(yáng)性率比國(guó)標(biāo)方法高經(jīng)用生化實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證確認(rèn)國(guó)標(biāo)方法存在一定的漏檢。目前多采用制備單克隆抗體的ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)。有報(bào)道稱其最低檢測(cè)量可達(dá)500cfug僅需22h并

12、實(shí)現(xiàn)了以ELISA技術(shù)為基礎(chǔ)的全自動(dòng)檢測(cè)[14]。田銀芳等[15]建立了沙門氏菌的直接ELISA方法檢測(cè)350份鮮牛奶樣品中的沙門氏菌。作者指出直接ELISA的敏感度和特異性都達(dá)到滿意的效果且分析時(shí)間大大縮短僅需要23d。另外乳制品中的霉菌也可以應(yīng)用ELISA檢測(cè)。例如Tsai等[16]就應(yīng)用ELISA檢測(cè)奶酪和酸牛奶中常見(jiàn)的青霉、毛霉和曲霉等。4.5檢測(cè)乳制品中的毒素檢測(cè)乳制品中的毒素黃曲霉毒素是一種致毒性和致癌性很強(qiáng)的毒素各國(guó)都嚴(yán)格