TWEAK在上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用初探.pdf

1、研究目的:
　　腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑(TWEAK)是腫瘤壞死因子超家族的新成員,通過與其受體成纖維細(xì)胞因子誘導(dǎo)14(Fn14)結(jié)合后發(fā)揮作用。TWEAK及其受體Fn14在多種腫瘤細(xì)胞與組織中表達(dá),具有廣泛的生物學(xué)活性,在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞增殖和血管形成,提高細(xì)胞侵襲力,誘導(dǎo)炎癥因子表達(dá)等方面發(fā)揮作用。研究表明TWEAK、Fn14在人卵巢癌組織中表達(dá),但TWEAK、Fn14在卵巢癌發(fā)生發(fā)展,侵襲和轉(zhuǎn)移以及對免疫細(xì)胞的作用

2、及作用機(jī)制尚未見報(bào)道。本研究目的在于通過對TWEAK在卵巢癌轉(zhuǎn)移中起到的作用進(jìn)行初步探討,對今后發(fā)展新的治療方法提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)參考數(shù)據(jù)。
　　研究方法:
　　1.采用體外實(shí)驗(yàn)的方法觀察TWEAK對HO-8910PM細(xì)胞侵襲、移動和粘附能力的影響,觀察TWEAK對細(xì)胞IkB-α、NF-kB(P65)和VEGF蛋白表達(dá)的影響,以及應(yīng)用NF-kB拮抗劑吡咯醛二硫氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,P

3、DTC)處理后VEGF的變化趨勢,探討TWEAK在卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用、可能機(jī)制及其信號傳導(dǎo)途徑。
　　2.使用免疫組化方法檢測不同卵巢腫瘤組織中TWEAK,Fn14,VEGF,微血管(CD34)的表達(dá)情況。對表達(dá)情況進(jìn)行分析,并與樣本的臨床信息進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì),尋找TWEAK,Fn14;VEGF,微血管(CD34)在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中的表達(dá)特點(diǎn)及其相互之間的關(guān)系。
　　3.采用體外細(xì)胞共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)方法,觀察TWEAK刺

4、激后的THP-1細(xì)胞上清對卵巢癌細(xì)胞HO-8910PM在細(xì)胞增殖、侵襲能力上的影響。使用realtime PCR及ELISA方法檢測TWEAK刺激后HO-8910PM中MCP-1 mRNA以及蛋白的表達(dá)變化,采用ELISA方法檢測TWEAK刺激后THP-1細(xì)胞表達(dá)TNF-α的變化。采用TWEAK與TNF-α共刺激的方法觀察卵巢癌細(xì)胞的增殖能力。闡述TWEAK刺激后的巨噬細(xì)胞在卵巢癌轉(zhuǎn)移中可能起到作用的途徑。
　　4.采用體外實(shí)驗(yàn)的

5、方法探討NF-kB微小RNA199a在細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響,采用western blot的方法觀察微小RNA199a轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,對細(xì)胞內(nèi)NF-kB通路的影響,尋找微小RNA199a與TWEAK在細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的共通點(diǎn)及相互關(guān)系,為今后的研究打下基礎(chǔ)。
　　研究結(jié)果:
　　1.TWEAK對人卵巢癌細(xì)胞HO-8910PM增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制研究。
　　(1)TWEAK對人卵巢癌細(xì)胞HO-8910PM的增殖沒有

6、影響。
　　(2)TWEAK能夠增強(qiáng)HO-8910PM細(xì)胞對Matrigel的粘附能力。
　　(3)TWEAK能促進(jìn)HO-8910PM細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
　　(4)TWEAK能在HO-8910PM細(xì)胞中促進(jìn)NF-kB的激活以及IkB的磷酸化。
　　(5)TWEAK通過NF-kB通路的激活能夠促進(jìn)VEGF的表達(dá)。
　　(6)NF-kB抑制劑能夠抑制TWEAK誘導(dǎo)的細(xì)胞粘附遷移和侵襲。
　　2.TWE

7、AK,Fn14,VEGF以及新生微血管(CD34)在卵巢癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)病理資料分析
　　(1)TWEAK和Fn14的表達(dá)水平在惡性腫瘤中要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于良性腫瘤(P＜0.0001)。
　　(2)在具有不同臨床特征的惡性卵巢癌病例之間的TWEAK/Fn14的表達(dá)是沒有差異的。
　　(3)卵巢癌不同病理類型中TWEAK和Fn14的表達(dá),結(jié)果各組也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,只要是卵巢癌,其表達(dá)均在80％以上。
　　(4)不同卵

8、巢組織中VEGF的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;各組間微血管(CD34)計(jì)數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,均以惡性腫瘤組為最高。
　　(5)TWEAK與VEGF的表達(dá)呈一個正相關(guān)的形式(CorrelationCoefjficient=0.704)。
　　3.TWEAK對巨噬細(xì)胞的影響在卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用研究。
　　(1)TWEAK能夠通過刺激巨噬細(xì)胞影響HO-8910PM細(xì)胞的增殖力。
　　(2)TWEAK能夠通過巨噬細(xì)胞來抑制HO-891

9、0PM細(xì)胞的侵襲能力。
　　(3)TWEAK能夠誘導(dǎo)HO-8910PM細(xì)胞MCP-1(單核細(xì)胞趨化蛋白-1)mRNA以及蛋白的表達(dá)。
　　(4)TWEAK能夠上調(diào)THP-1細(xì)胞TNF-α的表達(dá)。
　　(5)TWEAK和TNF-α共同作用能夠抑制HO-8910PM的增殖。
　　4.有關(guān)NF-kB通路與miR-199a在細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的擴(kuò)展研究
　　(1)MiR-199a在內(nèi)異癥患者中的在位內(nèi)膜和卵巢異位內(nèi)膜中

10、的表達(dá)是降低的。
　　(2)異位表達(dá)的miR-199a能夠降低ESC細(xì)胞的侵襲性。
　　(3)MiR-199a能夠抑制NF-kB通路的激活。
　　(4)MiR-199a能夠抑制ESC細(xì)胞IL-8的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.TWEAK能夠通過激活NF-kB和上調(diào)VEGF的表達(dá)來促進(jìn)人卵巢癌細(xì)胞HO-8910PM細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。抑制TWEAK激活的NF-kB通路能夠抑制細(xì)胞的粘附,遷移和侵襲。TWEAK-Fn14

11、/NF-kB通路可能是調(diào)節(jié)卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的一個潛在的通路。
　　2.TWEAK,Fn14,VEGF,微血管(CD34)在卵巢惡性腫瘤中是高表達(dá)的,TWEAK與卵巢癌的發(fā)生有關(guān),與卵巢癌的進(jìn)展沒有明顯的相關(guān)性。TWEAK的表達(dá)與VEGF在卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)有著正相關(guān)性。但是在腫瘤的分級以及轉(zhuǎn)移中沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.TWEAK刺激巨噬細(xì)胞后能對卵巢癌細(xì)胞HO-8910PM的增殖以及侵襲能力產(chǎn)生抑制作用。TWEAK能刺激T

12、HP-1細(xì)胞表達(dá)TNF-α,TWEAK與TNF-α聯(lián)合應(yīng)用有著明顯的抑制卵巢癌細(xì)胞增殖的作用。TWEAK能夠誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞表達(dá)MCP-1。TWEAK可能能夠通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞來抑制卵巢癌的增殖和轉(zhuǎn)移。
　　4.NF-kB通路介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力能夠通過miR-199a來抑制,其可能的機(jī)制是通過下調(diào)IL-8來實(shí)現(xiàn)的,miR-199a是否能夠下調(diào)TWEAK誘導(dǎo)細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力還有待進(jìn)一步研究,在未來的研究中將對TWEAK與miR-1