卡介菌多糖核酸制備條件的優(yōu)化與毒理學(xué)初步研究.pdf

1、卡介菌多糖核酸（BacilluS Calmette-Guerin-polysaccharide-nutleic acid，BCG-PSN）是我國首創(chuàng)的新型治療和免疫調(diào)節(jié)劑，它能夠提高T淋巴細(xì)胞的免疫功能，通過激活T淋巴細(xì)胞促進白細(xì)胞介素等分泌，產(chǎn)生多種免疫調(diào)節(jié)的淋巴因子，增強巨噬細(xì)胞的功能，提高機體免疫細(xì)胞殺傷細(xì)菌、病毒等病原體的能力，提高溶菌酶活力。經(jīng)臨床驗證，BCG-PSN已成為目前預(yù)防和治療慢性支氣管炎、哮喘、感冒、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、

2、神經(jīng)性皮炎等的理想藥物。但關(guān)于卡介菌多糖核酸制備條件的優(yōu)化和其毒理學(xué)作用研究目前還比較少見。本文擬對BCG-PSN的制備條件的優(yōu)化和毒理學(xué)作用進行初步研究，為BCG-PSN的制備及其在臨床上的應(yīng)用提供科學(xué)的參考依據(jù)。
　　 1 BCG-PSN的制備及質(zhì)量控制
　　 BCG-PSN是從卡介菌中提取的一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的物質(zhì)，臨床應(yīng)用表明其具有較好的療效。本文設(shè)計苯酚濃度，苯酚溫度、苯酚次數(shù)和乙醇倍數(shù)四個影響提取效果的試驗

3、因素，并分別設(shè)立三個實驗水平進行正交試驗，采用超聲破碎，熱酚法去除蛋白質(zhì)提取BCG-PSN，測定多糖和核酸含量，進行方差分析，同時進行精密度考察和重現(xiàn)性考察，用25％磺基水楊酸檢測蛋白，以確定BCG-PSN提取的最優(yōu)條件。結(jié)果顯示，苯酚濃度為90％，苯酚次數(shù)為1次，苯酚溫度為60℃，乙醇為7倍量時為最優(yōu)提取條件，磺基水楊酸檢測蛋白呈陰性。
　　 2 BCG-PSN毒理學(xué)作用的研究
　　 本試驗對BCG-PSN的急性毒性，

4、亞慢性毒性和致突變作用進行了研究。采用固定劑量法結(jié)合最大溶解度進行急性毒性試驗；連續(xù)2周給小鼠腹腔注射BCG-PSN進行亞慢性毒性試驗；同時對小鼠的骨髓微核和精子畸形進行研究評價其致突變毒性。結(jié)果顯示，在最大溶解度2000 mg·kg-1·bw-1的劑量范圍內(nèi)，小鼠僅出現(xiàn)輕微的中毒癥狀，未出現(xiàn)死亡，故BCG-PSN小鼠腹腔注射的LD50>2000 mg·kg-1·bw-1；亞慢性毒性試驗中小鼠在整個試驗周期內(nèi)反應(yīng)靈敏、活動正常且未出現(xiàn)死

5、亡；高劑量組和中劑量組小鼠采食量在前期顯著低于對照組（p<0.05），后期差異不顯著（p>0.05），高劑量組小鼠體重在試驗前期與對照組差異顯著（p<0.05）；器官指數(shù)除高劑量組脾臟在整個試驗周期內(nèi)顯著高于對照組外（p<0.05），其他指標(biāo)均差異不顯著（p>0.05）；血常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)高劑量組和中劑量組白細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積和平均紅細(xì)胞容積顯著低于對照組（p<0.05）；血液生化檢測結(jié)果顯示，試驗前期高劑量組血液尿