AT1RshRNA重組腺病毒載體在C6細(xì)胞中的功能表達(dá)及對SHR的AT1R分布的影響.pdf

1、目的：利用靶向大鼠血管緊張素Ⅱ1型受體(AT1R)基因mRNA的短發(fā)夾RNA(shRNA)腺病毒載體，研究對體外培養(yǎng)的大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞株的AT1R基因的沉默作用，以及對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)體內(nèi)器官AT1R蛋白分布的影響，探索AT1RshRNA腺病毒載體作為高血壓基因治療新策略的可行性，為利用基因沉默技術(shù)從轉(zhuǎn)錄后水平進(jìn)行高血壓治療的研究做準(zhǔn)備。 方法：培養(yǎng)人胚腎293細(xì)胞擴(kuò)增腺病毒載體，TCID50法測定病毒滴度。利用

2、擴(kuò)增的病毒載體轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的C6細(xì)胞株，并在不同時相收集轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，進(jìn)行RT-PCR和Westernblot檢測C6細(xì)胞AT1RmRNA和蛋白的表達(dá)。重組腺病毒載體通過尾靜脈注射法轉(zhuǎn)染SHR，免疫組織化學(xué)法測定SHR主要器官：心臟、肝臟、腎臟、腎上腺和主動脈AT1R表達(dá)。 結(jié)果：1、針對AT1R的shRNA重組腺病毒載體體外轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的C6細(xì)胞，抑制C6細(xì)胞AT1RmRNA及蛋白表達(dá)的結(jié)果類似，AT1RmRNA和蛋白表達(dá)均顯著下降

3、。2、針對AT1R的shRNA重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染SHR，通過免疫組織化學(xué)法證實(shí)，大鼠主要器官：心臟、肝臟、腎臟、腎上腺、主動脈的AT1R表達(dá)明顯降低。 結(jié)論：成功利用靶向大鼠血管緊張素Ⅱ1型受體基因mRNA的短發(fā)夾RNA腺病毒載體，在體外和體內(nèi)環(huán)境下證實(shí)可以高效特異性抑制靶基因的表達(dá)，導(dǎo)致其蛋白的翻譯受到抑制，達(dá)到基因干擾的目的。為利用RNAi從轉(zhuǎn)錄后水平對心血管疾病進(jìn)行治療做出有益的探索，為進(jìn)一步研究基因沉默在自發(fā)性高血壓大鼠