血小板衍生生長因子C腺病毒載體的構建及在內(nèi)皮祖細胞中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建含大鼠血小板衍生生長因子C(PDGF-C)基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重組腺病毒表達載體，體外轉染骨髓源性內(nèi)皮祖細胞(EPCs)并觀察目的基因蛋白及mRNA表達。
　　 方法:通過RT-PCR法從plRES2-EGFP-PDGF-C真核表達載體中獲得PDGF-C目的片段，經(jīng)BP重組插入中間載體pDONR221，再經(jīng)過LR重組到 pAd/CMV/V5-DEST，構建pAd-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病

2、毒載體。酶切及DNA測序鑒定后轉染HEK293A包裝、純化，測定病毒滴度后轉染大鼠骨髓源性EPCs，應用Real-time qPCR、Western blot等方法檢測PDGF-C蛋白及mRNA的表達。
　　 結果:核酸內(nèi)切酶消化及PCR分析證實PDGF-C基因成功插入pAD/CMV/V5-DEST腺病毒載體，轉染后熒光顯微鏡下觀察可見綠色熒光蛋白表達，轉染48h后Real-time qPCR測定EPCs中PDGF-C含量明顯提

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