Junctophilin-2對小鼠心肌細胞Ca2+激活K+電流的影響.pdf

1、摘要IJunctophilinJunctophilin2對小鼠心肌細胞對小鼠心肌細胞CaCa22激活激活K電流的影電流的影響碩士研究生：楊陽導師：章茜教授專業(yè)：生理學鄭州大學基礎醫(yī)學院生理教研室河南鄭州450001摘要摘要1研究背景與目的:小電導Ca2激活K通道(smallconductancecalciumactivatedpotassiumchannelsSK，Kca2)可以表達在幾乎所有的可興奮細胞的細胞膜上。SK2通道是哺乳類動

2、物心臟中表達的一種重要的離子通道，在心肌細胞動作電位復極化中起著關鍵作用，尤其是在復極晚期。已有的研究表明，SK2通道的激活是通過細胞內的鈣離子連接鈣調蛋白，通過誘導通道的構象改變從而引起通道開放。細胞外的鈣離子是通過細胞膜上的鈣離子通道得以進入細胞內從而調節(jié)SK2通道的開放，然而細胞內肌漿網(wǎng)膜上的蘭尼堿受體（ryanodinerecepts，RyRs）敏感的鈣釋放也會影響到SK2通道的功能。細胞膜表面與肌漿網(wǎng)（sarcoplasmic

3、reticulum，SRER）離子通道之間的功能交通是可興奮細胞的一個重要特征，而位于兩者之間的耦聯(lián)膜復合體（junctionalmembranecomplexes，JMCs）是實現(xiàn)其交通的結構基礎。Junctophilin（JP，JPH）是參與形成耦聯(lián)膜復合體的一個蛋白分子，其主要功能是在耦聯(lián)膜復合體中使細胞膜和肌質網(wǎng)之間維持一個相對固定的距離，從而為細胞膜與肌漿網(wǎng)之間的信號轉導提供了結構基質。在哺乳動物的基因組中，JPH的4個組織特

4、異性基因亞型分別為JPH1JPH2JPH3JPH4，JPH2是作為一種調節(jié)心肌細摘要III3結果：1)PCR和陽性克隆測序證實了重組JPH2腺病毒表達載體已經(jīng)構建成功；2)流式細胞儀檢測表明MOI值為100時，ADNT組、pADJPH2siRNA感染組對原代培養(yǎng)小鼠心肌細胞的感染效率分別為76.9%、75.4%；3)Westernblot技術檢測蛋白表達量，表明轉染了ADJPH2siRNA重組腺病毒的新生小鼠心肌細胞JPH2及SK2蛋白

5、的表達明顯抑制；4)全細胞膜片鉗記錄各組細胞的IkCa，與正常對照組和ADNTsiRNA組相比較，ADJPH2siRNA重組腺病毒感染的新生小鼠心肌細胞中，所測得的SK2通道介導的K電流明顯降低。4小結：本實驗將已構建成功的針對JPH2基因的siRNA重組腺病毒載體轉染新生小鼠心肌細胞，通過干擾JPH2基因的表達可顯著抑制SK2蛋白的表達并降低心肌細胞Ca2激活K電流。關鍵詞：關鍵詞：Junctophilin；SK通道；RNA干擾；心肌