p55PIK對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控和DNA合成的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：p55PIK的N 端24個(gè)氨基酸(以下簡(jiǎn)稱(chēng)N24)能夠抑制細(xì)胞S 期進(jìn)展，使細(xì)胞阻滯在G0/G 1 期，其可能機(jī)制有Rb 依賴(lài)的途徑和Rb 非依賴(lài)途徑的可能性。本研究通過(guò)p55PIK 腺病毒，高表達(dá)p55PIK,檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期及DNA合成的影響，并尋找其Rb 非依賴(lài)性機(jī)制。
　　 方法：利用本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的腺病毒Ad-p55PIK-GFP，在FTC236細(xì)胞(天然Rb 缺失的甲狀腺癌細(xì)胞)內(nèi)高表達(dá)p55PIK，west

2、ern blot 方法證明p55PIK 高表達(dá)后，通過(guò)Brdu和H3 參入的方法檢測(cè)p55PIK 對(duì)FTC236細(xì)胞DNA合成的影響，PI 方法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期的影響。通過(guò)定量免疫共沉淀方法（quantity co-immunoprecipitationQIP)證明p55PIK 對(duì)細(xì)胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen PCNA)與DNA聚合酶δ(DNApolymeraseδ)之間結(jié)合的影響

3、，免疫共沉淀（co-immunoprecipitationIP）證明p55PIK與細(xì)胞核增殖抗原之間的結(jié)合關(guān)系，闡述p55PIK 促進(jìn)DNA合成的Rb 非依賴(lài)性機(jī)制。
　　 結(jié)果:通過(guò)高表達(dá)p55PIK，Brdu和H3 檢測(cè)均發(fā)現(xiàn)p55PIK 能促進(jìn)FTC236細(xì)胞DNA的合成，PI 方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)p55PIK 能促進(jìn)其S 期的增多。通過(guò)IP 證實(shí)p55PIK 能夠與PCNA 結(jié)合，高表達(dá)p55PIK 能夠促進(jìn)PCNA和DNA聚合